| 摘要 |
<p>La présente invention décrit une nouvelle enzyme protéolytique, isolée au Laboratoire de Génie Enzymatique et de Microbiologie (LGEM), a partir de l'extrait intestinal de Baliste (Balistes capriscus), pouvant avoir des applications biotechnologiques grâce a ses caractéristiques biochimiques exceptionnelles. La trypsine de l'invention est purifiée en trois étapes: une précipitation fractionnée a l'acétone, une filtration sur gel Sephadex G-l00 et une chromatographie échangeuse d'anion sur Mono Q-Sepharose. Le facteur de purification obtenu est de 13,9 avec un rendement de 41,3% et une activité spécifique sur le N alpha-benzoyl-DL-arginine-p-nitroanilide (BAPNA) de 4 U/mg de protéines. La masse moléculaire de l'enzyme de l'invention, estimée par SDS-PAGE et filtration sur gel, est de l'ordre de 23,2 kDa. L'enzyme faisant l'objet de cette invention est inhibée par l'inhibiteur spécifique des trypsines (SBTI) et par le phenylmethylsulphonyl fluoride (PMSF) inhibiteur des proteases a serine. La séquence N-terminale des 12 premiers acides amines de la protease purifiée est IVGGYECTPNST. Cette séquence montre une forte homologie avec les trypsines des vertèbres marins avec la présence de quelques différences qui la caractérise. La trypsine de l'invention est hautement active dans une large gamme de pH allant de 9 à 11,5 avec un optimum à pH 10,5 en utilisant le BAPNA comme substrat. Les activités relatives à pH 9,0, 11,5 et 12,0 sont de l'ordre de 86,5%, 92,6% et 52,4%, respectivement. De plus, l'enzyme de l'invention est très stable dans une large gamme de pH allant de 7,0 à 12,0. La trypsine est très active à des températures relativement basses avec un optimum à 40°C. L'enzyme maintient plus de 80% de son activité maximale à 20°C. La trypsine de Baliste est assez stable en présence d'agents oxydants, elle retient approximativement 87% et 80% de son activité initiale après une heure d'incubation en présence de 1 % de perborate de sodium et de H2O2, respectivement, ce qui est en faveur de son intégration dans des formulations détergentes. L'enzyme de l'invention s'est révélée également compatible avec la plupart des détergents solides commerciaux testès à une concentration de 7 mg/ml et à 40°C.</p> |
