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Un proceso de inserción de una secuencia de ácido nucleico de interés en un ácido nucleico aceptor, que comprende las etapas siguientes: amplificar por PCR un ADN que comprende, en el siguiente orden, un segmento de secuencia U, un segmento de secuencia de ácido nucleico de secuencia de nucleótidos conocida K2 y un segmento de secuencia de ácido nucleico de secuencia conocida K3, usando un cebador directo que define un primer extremo del ADN amplificado y un cebador inverso que define un segundo extremo del ADN amplificado, terminando dicho cebador inverso en su extremo 3' en una secuencia de nucleótidos de segmentos de secuencia de ácido nucleico K3; tratar las moléculas de ADN bicatenario lineal contenidas en el producto de PCR obtenido en la etapa anterior con una exonucleasa para obtener un saliente monocatenario en el primer extremo del ADN y un saliente monocatenario que comprende los segmentos de ácido nucleico K2 y K3 en el segundo extremo del ADN; hibridar el producto de la etapa anterior con un ácido nucleico aceptor bicatenario linealizado que tiene en un primer extremo del mismo un saliente monocatenario complementario al saliente monocatenario del primer extremo del ADN y, en un segundo extremo del mismo, un saliente monocatenario complementario al segmento de secuencia monocatenario K2 del segundo extremo del ADN; y usar el producto de reacción obtenido en la etapa anterior para transformar una célula hospedadora. |
