用金磁微粒去除高丰度蛋白的方法

摘要

本发明涉及一种采用金磁微粒去除血清/浆等生物样品白蛋白和/或抗体等高丰度蛋白方法。金磁微粒是指以磁性纳米粒子或磁性纳米粒子的聚集体为核，在核表面包覆单质金、银等贵金属壳层形成的磁性复合微粒，也指以磁性纳米粒子或磁性纳米粒子的聚集体为核，在核表面组装纳米金、银等贵金属粒子形成的磁性复合微粒。本发明是通过亲和层析的方法将高丰度蛋白的亲和配基固定到金磁微粒表面，利用白蛋白或/和抗体与其相应亲和配基的亲和作用以及金磁微粒的超顺磁性从而在磁场中将白蛋白或/和抗体等高丰度蛋白从血清/浆等生物样品中分离出来以达到去除的目的。具有去除效率高、去除的特异性强、去除过程便捷的优点。

主权项

一种用金磁微粒去除高丰度蛋白的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：1]用金磁微粒固定高丰度蛋白的亲和配基：取金磁微粒置于离心管中，磁性分离，弃上清；用偶联缓冲液清洗两次，磁性分离，弃上清；加入溶解在偶联缓冲液中的高丰度蛋白亲和配基，在摇床中反应转速180r/min，37℃条件下，充分反应10min，磁性分离，弃上清；加入清洗缓冲液清洗，磁性分离，弃上清；加入封闭剂，在20～40℃条件下，充分反应2h，磁性分离，弃上清；再加入清洗缓冲液清洗，磁性分离，弃上清，重复清洗三次；加入保存缓冲液，2～8℃保存备用；所述偶联缓冲液是0.005M～1M的pH7.0～9.0的Tris‑HCl缓冲液，所述清洗缓冲液为上述偶联缓冲液或者是含0.02～0.2％吐温的偶联缓冲液；所述封闭剂是偶联缓冲液与1％～10％外加成份的混合溶液，外加成份是牛血清白蛋白、赖氨酸、脱脂奶粉、乙醇胺和动物血清中的一种或多种的混合物；所述保存缓冲液是含0.1％叠氮钠和0.1％BSA的1×PBS缓冲液。2]稀释待处理生物样品：对待处理生物样品用去除缓冲液进行稀释；所述去除缓冲液是0.005M～1M的pH7.0～9.0的Tris‑HCl缓冲液或者0.5×～20×的pH5.0～8.0的PBS缓冲液；3]将金磁微粒和待处理生物样品共同反应：将固定了高丰度蛋白亲和配基的金磁微粒磁性分离，弃上清，加入去除缓冲液，混合均匀，磁性分离，弃上清；加入稀释后的待处理生物样品，37℃条件下，反应转速是在摇床中180r/min，去除抗体时的反应时间是10min，去除白蛋白的反应时间是30min。4]去除高丰度蛋白：将反应后的金磁微粒磁性分离，移取分离后上清即为去除了白蛋白或/和抗体的生物样品。