基于脂肪酶反应扩散的时间温度指示器的制备方法和应用

摘要

本发明涉及一种基于脂肪酶反应扩散的时间温度指示器的制备方法和应用，其制备步骤包括凝胶状反应底物的上盖制备与含有凝胶酶基板的底板的制备；激活以前，含有凝胶状的反应底物的上盖与含有凝胶酶基板的底板两部分是分离的，分开在4℃下冷藏；使用时，将含有凝胶状的反应底物的上盖压合在含有凝胶酶基板的底板上，使凝胶状反应底物的底物凝胶与凝胶酶基板接触激活即可；两者接触后便生酶促反应，形成一条黄色带；根据黄色带的扩散长度来判断确立其对时间温度的积累效应；根据建立的TTI的活化能与影响因素之间的关系，与所要预测的食品进行活化能匹配，就可以方便可靠的监测食品在生产、储运和销售过程中的质量状况。

主权项

一种基于脂肪酶反应扩散的时间温度指示器的制备方法，其特征是：采用以下制备步骤：(1)、上盖、底板分别采用透明硬质或软质高分子材料制备成长方形；并分别在上盖、底板上设有槽；(2)、凝胶状反应底物的制备：在容器中加入三乙酸甘油酯，然后用质量浓度为8％的聚乙烯醇水溶液定容，用搅拌机以180～220r/min速度搅拌2min得到均匀的乳化液，取0.3ml乳化液注入上盖的槽中，水平放置，在‑20℃温度条件下冷冻16h，然后取出，并在常温下解冻6h，得到凝胶状的反应底物即含有凝胶状的反应底物的上盖；所述三乙酸甘油酯和聚乙烯醇水溶液的体积比为5∶95～30∶70；(3)、酶基板的制备：取脂肪酶液用量体积比为2％～10％、Gly‑NaOH缓冲液用量体积比为5％～30％、0.1％溴百里酚蓝酸碱指示剂用量体积比为5％、1mol/L的CaCl2溶液用量体积比1％、质量浓度为15％甘露糖醇水溶液用量体积比0.5％，聚乙二醇400用量体积比为1％混合均匀，用质量浓度为8％的聚乙烯醇水溶液定容，放在振荡器中振荡15～25min得到混合溶液，取混合溶液0.6～2.4ml注入底板槽中，在‑20℃温度条件下冷冻16h，然后在14℃下解冻6h，即得到凝胶酶基板即含有凝胶酶基板的底板；所述脂肪酶液的脂肪酶浓度为10～40g/Ml；酶活力为20000U/g；所述聚乙烯醇水溶液聚合度1750±50；用量体积比为55％～90％；(4)、时间温度指示器制备：包括含有凝胶状的反应底物的上盖、含有凝胶酶基板的底板两部分，激活以前，含有凝胶状的反应底物的上盖与含有凝胶酶基板的底板两部分是分离的，分开在4℃下冷藏；使用时，将含有凝胶状的反应底物的上盖压合在含有凝胶酶基板的底板上，使凝胶状反应底物的底物凝胶与凝胶酶基板接触激活即可。