聚丙烯酸包覆四氧化三铁磁性纳米粒子的制备及其应用

摘要

聚丙烯酸(PAA)包覆四氧化三铁磁性纳米粒子的制备及其应用，属于纳米材料和生物工程技术领域。本发明包括PAA四氧化三铁磁性纳米粒子的制备方法以及PAA四氧化三铁磁性纳米粒子用于细胞DNA的提取纯化。本发明提供了一种高温分解法制备PAA四氧化三铁磁性纳米粒子的方法，制备的磁性纳米粒子用于细胞DNA高效提取纯化，大大提高提取率，且操作更加简便。建立在磁性纳米粒子基础上的DNA纯化方法无论是分离效率还是DNA收率都不逊于传统方法。

主权项

聚丙烯酸PAA包覆四氧化三铁磁性纳米粒子的应用，其特征在于用于细胞DNA的分离纯化，步骤如下：(1)2mL细胞，1000rpm离心5min，弃上清，加生理盐水5mL，离心2次；(2)离心后的细胞加5μL细胞裂解液混匀，细胞裂解液组成为：含3M NaCl、5M尿素、40g/L Triton X‑100、10mM乙二胺四乙酸、pH 6.5的25mM Tris‑HCl缓冲液，加25μg/μL的蛋白酶K 10μL及40μg/μL的RNA酶5μL，37℃孵育30min，加入18mg/mL的PAA包覆四氧化三铁磁性纳米粒子10μL，静置2min，加异丙醇20μL静置2min，磁分离，加质量浓度70％的乙醇20μL，磁分离，弃上清，加Tris‑EDTA缓冲液20μL，37℃孵育5min，磁分离，取上清，即为DNA洗脱液；所述PAA包覆四氧化三铁磁性纳米粒子的制备步骤为：(a)称量100mmol的NaOH溶于20mL二甘醇DEG中，在氮气保护下油浴120℃加热1h，搅拌使NaOH全部溶解，得到淡黄色胶状NaOH的DEG液体，70℃密封保存；(b)称量10mmol的PAA和4mmol FeCl3粉末，溶于20mL DEG中，氮气保护下油浴220℃加热回流2h后，加入15mL NaOH的DEG液体，继续220℃加热回流反应2h，得到黑色粘稠的胶体液，终止反应，静置冷却，得反应液；(c)取反应液于离心管中，加入5倍反应液体积的无水乙醇，8000rpm离心5min，重复洗涤3次，沉淀用去离子水洗涤2次，分散于反应液相等体积的去离子水中；(d)用0.22μm膜过滤，制得聚丙烯酸包覆四氧化三铁磁性纳米粒子；(3)紫外测得OD260/OD280的比值，并取2μL琼脂糖凝胶电泳。