一种慢病毒载体及其介导的分泌脑源性神经营养因子的骨髓间充质干细胞系的制备方法

摘要

本发明公开了一种慢病毒载体及其介导的分泌脑源性神经营养因子(BDNF)的骨髓间充质干细胞系的制备方法，包括以下步骤：(1)慢病毒表达载体的构建：利用PCR的方法，扩增人BDNF的cDNA序列，扩增后的人BDNF克隆入慢病毒表达载体，重组慢病毒表达载体命名为lenti-BDNF；(2)用优化参数的磷酸钙转染法包装慢病毒，并用超速离心法浓缩病毒颗粒，测定包装病毒的滴度；(3)用包装后的慢病毒颗粒，用逆转染法转导人骨髓间充质干细胞。本发明通过优化转染前细胞密度，2X转染缓冲液的pH值，转染后换液时间，以及CaCl2浓度，摸索出高效、低成本磷酸钙转染并包装病毒的方法。转导后的人骨髓间充质干细胞可以高效、持续分泌BDNF。

主权项

一种表达分泌型人脑源性神经营养因子的慢病毒表达载体。