一种从霞水母刺丝囊毒素内分离致死毒素蛋白的方法

摘要

本发明涉及海洋生物技术领域，具体的说是一种分离纯化霞水母致死毒素蛋白的方法。其分离方法如下：霞水母刺丝囊细胞经超声破碎提取得到水母粗毒素，透析除盐后先后依次经过亲和色谱层析分离和阴离子交换色谱技术分离纯化，最终得到一种具有致死活性水母毒素蛋白，测得其分子量为30kDa，并且测定其对斑马鱼的半致死量LD50为0.56μg毒素蛋白/g.鱼。本发明具快速、简便的特点，为获得霞水母致死毒素蛋白提供了重要的方法指导。

主权项

一种从霞水母刺丝囊毒素中分离致死毒素蛋白的方法，其特征在于：1)将霞水母刺丝囊细胞加入预冷缓冲液中破碎，破碎后2～6℃离心，收集上清液，待用；2)将上述步骤1)上清液于2～6℃下用缓冲液透析过夜，然后低温离心，收集上清液，待用；3)将步骤2)所得上清液过滤，而后用含Con A Sepharose 4B亲和柱进行分离，分离时采用含有0.1～0.3Mα‑甲基‑D‑甘露糖苷和0.1～0.3MNaCl的pH7.4，浓度10～30mM的Tris‑HCl缓冲液进行洗脱并收集洗脱液，低温离心，收集上清液，待用；4)将步骤3)得到的上清液用强阴离子交换树脂Mono Q预装柱纯化分离，依次采用pH7.8，浓度为10～30mM的Tris‑HCl缓冲液和含1M NaCl的pH7.8，浓度为10～30mM的Tris‑HCl缓冲液进行梯度洗脱，流速为0.2～0.5mLmin‑1，收集约25～40min洗脱液，即为从霞水母刺丝囊毒素中分离致死毒素蛋白。