一种海因酶法制备谷胱甘肽的方法

摘要

本发明公开了一种海因酶法制备谷胱甘肽的方法。该方法包括下列步骤：采用谷氨酸和氰酸盐为原料制备5-羧乙基海因；进而采用接肽试剂依次接上S-R基-L-半胱氨酸和甘氨酸制备N-海因丙酰-S-R基-L-半胱氨酰-甘氨酸；然后以含有L-海因酶和L-氨甲酰酶的湿菌体为催化剂，催化水解N-海因丙酰-S-R基-L-半胱氨酰-甘氨酸制备S-R基-谷胱甘肽；最后脱除S-R基制备得到谷胱甘肽。本发明方法采用海因环共保护谷氨酸中的α-氨基和α-羧基，仅暴露出γ-羧基，保证了接肽反应的位置专一性。本发明方法避免了多数化学合成中反复的保护与脱保护步骤，操作简单，减少了副反应的发生。

主权项

一种海因酶法制备谷胱甘肽的方法，其特征在于该方法包括下列步骤：(1)以氰酸盐和谷氨酸为原料，氰酸盐与谷氨酸的摩尔比为1～1.4∶1，在碱性条件下进行反应，酸化成环后形成5‑羧乙基海因；(2)采用接肽试剂将步骤(1)得到的5‑羧乙基海因末端羧基接上S‑R基‑L‑半胱氨酸，接肽试剂与5‑羧乙基海因的摩尔比为1～1.4∶1，S‑R基‑L‑半胱氨酸与5‑羧乙基海因的摩尔比为1～1.6∶1，经萃取、浓缩结晶得到N‑海因丙酰‑S‑R基‑L‑半胱氨酸；(3)采用接肽试剂将步骤(2)得到的N‑海因丙酰‑S‑R基‑L‑半胱氨酸末端羧基接上甘氨酸，接肽试剂与N‑海因丙酰‑S‑R基‑L‑半胱氨酸的摩尔比为1～1.4∶1，甘氨酸与N‑海因丙酰‑S‑R基‑L‑半胱氨酸的摩尔比为1～1.6∶1，经萃取、浓缩结晶得到N‑海因丙酰‑S‑R基‑L‑半胱氨酰‑甘氨酸；(4)以含有L‑海因酶和L‑氨甲酰酶的湿菌体为催化剂，在弱碱性条件下，催化水解步骤(3)得到的N‑海因丙酰‑S‑R基‑L‑半胱氨酰‑甘氨酸制备S‑R基‑谷胱甘肽，将所得的酶转化溶液经分离、冻干得到S‑R基‑谷胱甘肽；(5)将步骤(4)得到的S‑R基‑谷胱甘肽脱除S‑R基，经过滤、浓缩、离子交换分离得到谷胱甘肽。其中，所述R基为巯基保护基；步骤(4)中，所述的含有L‑海因酶和L‑氨甲酰酶的湿菌体为芽孢杆菌MH602Bacillusfordii MH602，CCTCC NO.M206144。