一种史氏鲟精子诱导西伯利亚鲟雌核发育的方法

摘要

本发明涉及一种史氏鲟精子诱导西伯利亚鲟雌核发育的方法，包括：(1)史氏鲟精子遗传物质的灭活；(2)西伯利亚鲟未受精卵的采集及史氏鲟灭活精子的授精；(3)热休克诱导西伯利亚鲟雌核发育：采用热休克抑制第二极体排出的方法诱导西伯利亚鲟雌核发育，热休克起始时间为受精后0.3τ0(16℃下18min)、热休克持续时间2min及热休克温度37℃；(4)雌核发育诱导卵的培育。利用本发明技术培育出西伯利亚鲟超雌鱼，将其与正常养殖雄鱼交配可生产出全雌性鱼苗，从而提高西伯利亚鲟养殖群体中雌性个体比例，提高养殖效益。

主权项

一种史氏鲟精子诱导西伯利亚鲟雌核发育的方法，包括：(1)史氏鲟精子遗传物质的灭活采集史氏鲟精子，镜检选取活力90％以上的用于紫外线灭活，取部分精液于8000r/min下离心15min，分离精浆，将精液与精浆按1∶4的体积比混合，置于4℃预冷的培养容器中，将培养容器置于铺有碎冰的摇床上，振荡频率90rpm，培养容器正上方放置有2支15W的紫外灯，以0.1mJ/(cm2.s)的紫外线照射精子6min，精子紫外线灭活剂量为36mJ/cm2；(2)西伯利亚鲟未受精卵的采集及史氏鲟灭活精子的授精选择性成熟的西伯利亚鲟雌鱼，人工催产到达效应时间后采用腹部挤压法采卵，收集后于16℃水温下，与上述灭活的史氏鲟精液，以1000粒卵:2ml灭活精液的比例，轻轻摇动混匀，其中精液使用量为0.2ml，然后加入20ml清水进行授精，授精水温16℃，授精时间2min，之后将授精后的受精卵用清水漂洗干净，再用20％的滑石粉悬浊液进行搅拌脱粘，此过程保持水温16℃；(3)热休克诱导雌核发育上述受精卵在16℃下受精后18min，将受精卵置于37℃的水浴中进行热休克，热休克时间2min，再将其移入16℃的水浴中复温；(4)雌核发育诱导卵的培育将上述经过热休克和复温后的受精卵继续脱粘，总脱粘时间45min，脱粘后的受精卵置于瓶式孵化器中孵化，孵化水温控制在16～18℃。