一种检测猪肉中莱克多巴胺的生物传感器方法

摘要

本发明公开了一种检测猪肉中莱克多巴胺的生物传感器方法。它利用了竞争抑制反应的原理，在芯片表面固定莱克多巴胺衍生物，然后将莱克多巴胺抗体和含有莱克多巴胺的样品混合后注射到芯片表面，则样品中莱克多巴胺抑制抗体与芯片表面莱克多巴胺衍生物的结合，利用样品中莱克多巴胺含量与抗体与芯片表面莱克多巴胺衍生物的结合相对响应值成反比，来检测样品中的莱克多巴胺的残留量，包括：猪肉样品的前处理、莱克多巴胺衍生物的固定、猪肉样品中莱克多巴胺的残留检测和分析检测结果。本方法操作简单，成本低，特异性强，无需标记，再生简单，回收率，精密度良好，并可实现实时检测。为准确的，低成本的猪肉中莱克多巴胺的在线检测提供了技术支持。

主权项

一种检测猪肉中莱克多巴胺的生物传感器方法，其特征是，包括以下步骤：(1)猪肉样品的前处理称取匀质好的猪肉样品，加入提取液，涡旋震荡，调PH为1.0，离心过滤后，滤液调PH到11，然后加入萃取液，震荡混匀，离心后移取上清液，重复萃取一次，合并上清液，氮气吹干后，用复溶液溶解后超声混匀，离心，过滤膜后，待生物传感器检测；所述提取液为高氯酸；所述萃取液为乙酸乙酯；所述复溶液为体积比1∶9的甲醇∶PBS缓冲液；(2)莱克多巴胺衍生物的固定首先将N‑乙基‑N′‑(二甲氨基丙基)碳二亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺混合后，对修饰有羧甲基化葡聚糖的芯片表面进行活化，然后将莱克多巴胺衍生物用醋酸缓冲溶液稀释后注入芯片表面，反应一段时间后，最后用乙醇胺灭活多余的酯键；(3)猪肉样品中莱克多巴胺的残留检测将步骤(1)制备的样品溶液与含有莱克多巴胺抗体的PBS缓冲液混合后，注入芯片表面反应，记录反应前后响应值的变化，然后通入HCl对芯片进行再生，每次通入样品前后都要通入含1％甲醇的PBS缓冲液；(4)分析检测结果用含1％甲醇的PBS缓冲液逐级稀释标准中间液，配制成一组工作标准溶液，其中抗体的最终稀释度为1∶200，莱克多巴胺的终浓度为0、1、2、5、10、20ng/mL，然后按随机顺序通入芯片，以每个浓度下的标准溶液所得的相对响应值为纵坐标，标准溶液的浓度为横坐标，建立标准校正曲线，在检测实际样品时，根据样品所得的相对响应值，然后从标准曲线中读出样品中药物含量。