一种用于临床检测的测序方法

摘要

本发明公开了一种结合荧光定量PCR的基因测序方法，它包括荧光定量PCR、酶解、测序反应、测序产物纯化、测序仪检测等步骤。本发明还公开了基于该方法制备基因检测试剂盒的应用。本发明的方法使用荧光定量PCR代替传统的定性PCR加电泳的模式对目的核酸进行扩增和扩增效果的检测，既缩短了检测时间，又避免了电泳过程中开盖带来的PCR气溶胶污染问题，降低了假阳性，非常适用于临床检测等医疗领域。同时，根据荧光定量PCR对目的片段的定量结果，可以得知目的片段的起始浓度，并大致判断PCR产物的浓度，可直接指导后续的基因测序，提高了检测的灵敏度和基因测序的效率。

主权项

一种结合荧光定量PCR的基因测序方法，其特征在于，它包括如下步骤：1）荧光定量PCR：使用目的片段特异性的引物和荧光探针，对目的片段的核酸模板，进行扩增，得到目的片段的定量结果和PCR产物；2）酶解：用外切酶和牛小肠碱性磷酸酶处理步骤（1）得到的PCR产物，以降解多余的引物和dNTP，避免对后续反应的干扰；3）测序反应：使用目的片段特异性的测序引物，对步骤（2）得到的酶解产物进行延伸反应，获得带荧光标记的测序产物；4）测序产物纯化：使用醋酸钠、无水乙醇、甲酰胺处理步骤（3）得到的测序产物，以获得高纯的测序产物；5）测序仪检测：将步骤（4）得到的测序产物上测序仪进行检测，获得目的片段的基因序列。