真核细胞中高化学计量的非遗传性突变的鉴定方法

摘要

本发明真核细胞中高化学计量的非遗传性突变的鉴定方法，提供了一种基于质谱分析的蛋白质组学技术和基因组DNA测序，对非遗传性突变(NGM)的单氨基酸突变导致的蛋白质合成错误的鉴定及半定量方法。本发明方法具体通过综合大规模蛋白质组分析、非限制性序列比对、合成肽段的高解析度二级质谱和三级质谱鉴定及基因测序，对NGM进行了系统解析，鉴定出4个蛋白的4个肽段中含有NGM。本发明估算出NGM在肽段中的发生率约0.05％，在蛋白质水平上高于0.3％。根据突变肽段及正常肽段的质谱肽谱计数比，NGM的化学计量介于0.05～0.71之间。通过本发明的鉴定方法首次证明了NGM的高发生率及高化学计量；同时，也预测了NGM作为一种可能的机制参于了基本的生物学和生理学过程。

主权项

一种非遗传性突变的鉴定方法，包括下述步骤：a.从真核细胞中提取线粒体蛋白质；b.对上述线粒体蛋白质进行大规模的蛋白质组学分析；c.识别所有可能带有点突变的NGM候选多肽；d.验证野生型突变多肽与突变型合成多肽的化学同一性；e.对含有点突变的多肽的对应DNA片段进行基因组DNA测序，以证实这些点突变是由蛋白质合成过程而不是由基因点突变所造成的。