二甲基精氨酸二甲胺水解酶测定方法及其诊断试剂

摘要

本发明是关于一种二甲基精氨酸二甲胺水解酶活力的酶学循环测定方法，及其诊断试剂。在设计的产品检测方法中：组织样本中的二甲基精氨酸二甲胺水解酶催化非对称二甲基精氨酸水解，生成瓜氨酸；在这一新的设计方法中，使瓜氨酸在瓜氨酸水解酶(EC 3.5.1.20)和鸟氨酸氨甲酰转移酶(EC 2.1.3.3)及其底物组成的酶循环反应系统不断循环反应，从而大大地提高了反应灵敏度，瓜氨酸生成量与样本中二甲基精氨酸二甲胺水解酶的活力成正比，通过测定循环酶反应体系中氨的生成速率，就可以达到测定样本中二甲基精氨酸二甲胺水解酶活力的目的。本发明试剂可以是干粉试剂，也可以是液体试剂；可以是单剂试剂，双剂试剂或多剂试剂。

主权项

一种对组织样本中二甲基精氨酸二甲胺水解酶(Dimethylarginine dimethylaminohydrolaseEC 3.5.3.18，DDAH)活力的测定方法，其方法学设计特征在于：样本中的二甲基精氨酸二甲胺水解酶催化底物非对称二甲基精氨酸水解为二甲胺和L‑瓜氨酸(L‑Citrulline)，产物L‑瓜氨酸在瓜氨酸水解酶(Citrullinase EC 3.5.1.20)的作用下，水解为L‑鸟氨酸、二氧化碳和氨；在这一新的产品检测方法中，使生成的L‑鸟氨酸与试剂中的氨基甲酰磷酸盐在鸟氨酸氨甲酰转移酶(Ornithine carbamoyltransferase EC 2.1.3.3)的催化作用下，再生成L‑瓜氨酸和磷酸盐。在其中的酶循环反应系统中，L‑瓜氨酸的生成量与样本中DDAH的活力成正比，氨的生成速率与L‑瓜氨酸的生成速率成正比，通过测定氨的生成速率可以计算出样本中被测物的浓度。其酶学方法学原理如下：非对称二甲基精氨酸+水二甲基精氨酸二甲胺水解酶L‑瓜氨酸+二甲胺L‑瓜氨酸+水瓜氨酸水解酶L‑鸟氨酸+二氧化碳+氨L‑鸟氨酸+氨基甲酰磷酸盐鸟氨酸氨甲酰转移酶L‑瓜氨酸+磷酸盐