检测T细胞微小RNA150相对含量反映个体免疫状态的技术

摘要

本发明公开了可用于对微小RNA150核苷酸片段进行相对定量检测的一条茎环引物和多条配套扩增的引物、试剂盒和评价表。试剂盒包括试剂A：5μM逆转录miR-150、U6的茎环引物混合液50μL；试剂B：20U/μL M-MuLV逆转录酶，50μL；试剂C：5×逆转录缓冲液，200μL含dNTP浓度为5mM(包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP)，Tris-HCl浓度为250mM，KCl浓度为250mM，MgCl₂浓度为20mM，50nM DTT。试剂D：2μM通用引物100μL；试剂E：2μM miR-150特异性引物100μL；试剂F：2μM U6特异性引物100μL；试剂G：5U/μL Taq DNA聚合酶，20μL；试剂H：2×PCR缓冲液组成，包含600nM ROX，1×SYBR Green I dye，2mM dNTPs(包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、80mM Tris-HCl、80mM KCl、40mM(NH₄)₂SO₄、6mM MgSO₄。本发明所提供的整套试剂盒可对不同类型T细胞的微小RNA150核苷酸片段进行相对定量分析，并对个体免疫状态进行评估。

主权项

一条用于微小RNA(microRNA，miR)150相对定量的引物，其特征是一条茎环引物，3’端带8个与microRNA150的5’端特异性互补的核酸序列SEQ ID NO.1，可用于逆转录miR‑150。