治疗糖尿病的中药颗粒剂的检测方法

摘要

本发明涉及一种用于治疗糖尿病的中药颗粒剂及其制法和质量控制方法；该中药颗粒剂由黄芪、西洋参、山茱萸、天花粉、葛根、水蛭、酒炙大黄、川芎制成；该中药颗粒剂的质量控制方法包括：黄芪、西洋参、山茱萸、葛根、大黄、川芎的薄层鉴别，黄芪的含量测定。

主权项

一种用于治疗糖尿病中药颗粒剂的检测方法，它的制剂由以下方法制得：黄芪1000g、西洋参267g、山茱萸333g、天花粉667g、葛根1000g、水蛭33g、酒炙大黄167g、川芎333g；水蛭研成细粉，过筛；黄芪、西洋参、山茱萸、葛根、大黄加4倍量80％乙醇，加热回流二次，每次2小时，合并乙醇液，回收乙醇，静置过夜，滤过，滤液减压浓缩成60℃相对密度为1.20～1.25的清膏，备用，药渣与天花粉、川芎二味，加6倍量的水浸泡3小时后，煎煮1小时，滤过，药渣再加4倍量水，煎煮二次，每次1小时，滤过，合并滤液，以6000转/分钟的转速，离心30分钟，上清液用超滤膜滤过，滤液减压浓缩成60℃相对密度为1.20～1.25的清膏；上述两种清膏混匀后，加入水蛭细粉及糊精100g、可溶性淀粉400g、甜菊苷15g，混匀，制成颗粒，干燥，制成1000g，其特征在于检测方法为：(1)黄芪的薄层鉴别：取本发明颗粒剂约3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，塞紧，称定重量，冷浸30分钟后，超声处理1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣加乙醚浸泡二次，每次30ml，约浸泡20分钟，倾去乙醚液残渣挥尽乙醚，加水10ml微热使溶解，放冷，置D101型内径1.5cm，高12cm大孔吸附树脂柱上，依次以0.5％氢氧化钠溶液40ml、水和30％乙醇各30ml洗脱，弃去洗脱液，再用70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取黄芪对照药材3g，同法制成对照药材溶液；再取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各6ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿—甲醇—水＝13∶6∶2且于10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘至斑点显色清晰；分别置日光下及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点；(2)西洋参的薄层鉴别：取本发明颗粒剂3g，加甲醇50ml，超声处理40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，移置分液漏斗中，加乙醚提取2次，每次20ml，弃去乙醚液，水层用水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的0.5％氢氧化钠溶液30ml洗涤一次，弃去氢氧化钠液，再用水洗涤2次，每次20ml，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取西洋参对照药材1g， 同法制成对照药材溶液；再取人参皂甙Rb1对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿—乙腈—甲醇—水＝15∶40∶20∶10且于5～10℃放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘至斑点显色清晰；分别置日光下及365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点；(3)山茱萸的薄层鉴别：取本发明颗粒剂12g，置索氏提取器中，加乙醚80ml，加热回流4小时，乙醚液挥干，残渣加沸点30～60℃的石油醚浸泡2次，每次20ml，约浸泡2分钟，倾去石油醚，残渣加无水乙醇—氯仿＝3∶2混合液2ml微热使溶解，作为供试品溶液；另取山茱萸对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷—氯仿—醋酸乙酯＝8∶2∶3.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰；分别置日光下及365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点；(4)葛根的薄层鉴别：取本发明颗粒剂2g，加甲醇30ml，超声处理40分钟，滤过，滤液浓缩至约5ml，加30～60目的聚酰胺2g拌匀，置水浴上蒸发除去溶剂，加于已处理好的条件为30～60目、1g、内径10～15ml的聚酰胺柱上，加水30ml洗脱，弃去水液，再加乙醇60ml洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取葛根对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各6ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿—乙腈—甲醇—水＝7∶2∶1.5∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；(5)大黄的薄层鉴别：取本发明颗粒剂2g，加甲醇30ml，超声处理40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加3.6％盐酸溶液20ml，加热回流30分钟，冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加氯仿2ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.2g，同法制成对照药材溶液；再取大黄素对照品，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸点为60～90℃的石油醚—醋酸乙酯—甲酸＝15∶5∶1的上层 溶液为展开剂，展开，取出，晾干；分别置日光下及365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点；置氨气中熏后，日光下检视，斑点变为红色；(6)川芎的薄层鉴别：取本发明颗粒剂10g，加甲醇80ml，超声处理40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，滤过，滤液加浓氨溶液调节pH至10，加醋酸乙酯提取2次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；另取川芎对照药材3g，同法制成对照药材溶液；再取盐酸川芎嗪对照品，加醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各8ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸点为60～90℃石油醚—氯仿＝4∶1为展开剂，另槽加等体积的氨试液，预平衡15分钟后，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(7)含量测定：取颗粒剂3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，塞紧，称定重量，冷浸30分钟后，超声处理1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣加乙醚浸泡二次，每次30ml，约浸泡20分钟，倾去乙醚液残渣挥尽乙醚，加水10ml微热使溶解，放冷，置D101型大内径1.5cm，高12cm孔吸附树脂柱上，依次以0.5％氢氧化钠溶液40ml、水和30％乙醇各30ml洗脱，弃去洗脱液，再用70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液4ul，对照品溶液2ul与4ul，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿—甲醇—水＝13∶6∶2且于10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照《中国药典》薄层扫描法进行扫描，波长：λs＝500nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，本发明颗粒剂每袋含黄芪以黄芪甲苷、分子式为C44H68O4计，不得少于1.7mg。