一种杜氏盐藻叶绿体转化载体的构建方法

摘要

一种杜氏盐藻叶绿体转化载体的构建，具体是以光非依赖性的原叶绿素酸酯还原酶chlN、chlB或者chlL基因为同源片段，以氯霉素乙酰转移酶基因（CAT）和除草剂草丁膦（PPT）的抗性基因bar为筛选标记，并以atpA启动子和rbcL终止子为表达元件，构建双交换双筛选标记杜氏盐藻叶绿体转化载体。通过基因枪法或者电激法转化杜氏盐藻，再经两步法筛选实现同质化，确保外源基因在杜氏盐藻叶绿体基因组的定点整合，最终获得稳定表达外源蛋白的叶绿体转化杜氏盐藻藻株。本发明选取chlN、chlB或者chlL基因作为同源片段，可作为转化子的辅助筛选标记；选择氯霉素抗性CAT基因和草丁膦抗性bar基因共同作为筛选标记基因，有利于在较短时间内获得稳定转化株。

主权项

一种杜氏盐藻叶绿体转化载体的构建方法，其特征在于：是以光非依赖性的原叶绿素酸酯还原酶chlN、chlB或者chlL基因为同源片段,以氯霉素乙酰转移酶CAT基因和除草剂草丁膦抗性基因bar为筛选标记，并以atpA启动子和rbcL终止子为表达元件构建双交换双筛选标记的杜氏盐藻叶绿体转化载体。