METODOS PARA PRODUCIR HIALURONANO EN UNA CELULA HUESPED RECOMBINANTE.

摘要

Método para la producción de un ácido hialurónico, que comprende: (I) cultivo de una célula huésped de Bacillus bajo condiciones adecuadas para la producción del ácido hialurónico, donde la célula huésped de Bacillus comprende un constructo de ácidos nucleicos que comprende un operón artificial que comprende una secuencia codificante de hialuronano sintasa, una secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6-deshidrogenasa y una secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa pirofosforilasa operativamente enlazada a una secuencia del promotor foránea a la secuencia codificante de hialuronano sintasa; donde (a) la secuencia codificante de hialuronano sintasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 70% identidad a SEC ID nº: 2, SEC ID nº: 95, SEC ID nº: 93, o SEC ID nº: 103 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 1, SEC ID nº: 94, SEC ID nº: 92, o SEC ID nº: 102 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii); (b) la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6-deshidrogenasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 70% de identidad a SEC ID nº: 12, SEC ID nº: 41, SEC ID nº: 97, o SEC ID nº: 105 (ii); una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 11, SEC ID nº: 40, SEC ID nº: 96, o SEC ID nº: 104 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (II); (c) la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa pirofosforilasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 70% de identidad a SEC ID nº: 22, SEC ID nº: 43, SEC ID nº: 99, o SEC ID nº: 107 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 21, SEC ID nº: 42 o SEC ID nº: 98, o SEC ID nº: 106 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (II); y (ii) recuperación del ácido hialurónico del medio de cultivo.