起搏通道基因亚型HCN2重组慢病毒载体的构建方法

摘要

本发明公开了一种起搏通道基因亚型HCN2重组慢病毒载体的构建方法，包括将带有HCN2基因的穿梭质粒与病毒系统一起建立HCN2重组病毒载体，所述穿梭质粒为pCDH1-GFP-HCN2，所述病毒为慢病毒。本发明将带有HCN2基因的穿梭质粒pCDH1-GFP-HCN2与慢病毒一起建立HCN2重组病毒载体，成为慢性心律失常的细胞治疗和基因治疗的基础。

主权项

一种起搏通道基因亚型HCN2重组慢病毒载体的构建方法，包括将带有HCN2基因的穿梭质粒与病毒系统混合重组建立HCN2重组病毒载体，其特征在于：所述穿梭质粒为pCDH1‑GFP‑HCN2，所述病毒为慢病毒；所述穿梭质粒pCDH1‑GFP‑HCN2的构建方法包括以下步骤：(1)通过限制性内切酶EcoR I和Xba I将目的片段HCN2基因从pcDNA3‑HCN2中切下，连接入Puc19质粒中，构建质粒Puc19‑HCN2；(2)通过限制性内切酶EcoR I和Hind III将目的片段HCN2基因从质粒Puc19‑HCN2中切下，连接入pcDNA3.1A质粒中，构建质粒pCDNA3.1A‑HCN2；(3)通过限制性内切酶Xba I将目的片段HCN2基因从pcDNA3.1A‑HCN2中双酶切切下，连接入pCDH1‑MCS1‑EF1‑copGFP质粒中，构建成所述穿梭质粒pCDH1‑GFP‑HCN2。