一种人工诱导臭马比木内生菌合成9-甲氧基-18,19-脱氢喜树碱的方法

摘要

本发明涉及一种诱导臭马比木内生菌合成9-甲氧基-18,19-脱氢喜树碱的方法，该方法是将臭马比木内生菌置于PDA平板培养基中培养3~4天，用接种环刮取菌落周边生长旺盛的菌丝体，接入装有玻璃珠的马铃薯蔗糖液体培养基中，用马铃薯蔗糖液体培养基稀释至菌体含量为10-4，得到菌悬液，在菌悬液中加入浓度为2~1500μM的诱导剂，培养4~7天，再次加入诱导剂，诱导剂的用量为0.2~1.5克/L液体培养基，培养3~5天，接种于PDA平板培养基中，筛选出合成9-甲氧基-18,19-脱氢喜树碱量高的菌株，然后进行发酵，用超声波提取，该方法生产成本低，生产过程中的环境污染程度低，对生产人员的毒害小，产品收率高，纯度高。

主权项

一种人工诱导臭马比木内生菌合成9‑甲氧基‑18,19‑脱氢喜树碱的方法，其特征在于：包括如下步骤：    （1）菌悬液的制备：    将臭马比木内生菌置于PDA平板培养基中培养3~4天，用接种环刮取菌落周边生长旺盛的菌丝体，接入装有玻璃珠的马铃薯蔗糖液体培养基中，25~30℃摇床培养40~50小时，转速为100~150/min，用马铃薯蔗糖液体培养基稀释至菌体含量为10‑4，得到菌悬液；    （2）人工诱变：在菌悬液中加入浓度为2~1500μM的诱导剂，培养4~7天，再次加入诱导剂，诱导剂的用量为0.2~1.5克/L液体培养基，培养3~5天，接种于PDA平板培养基中，筛选出合成9‑甲氧基‑18,19‑脱氢喜树碱量高的菌株。