用于治疗糖尿病的源自人脂肪组织的胰岛素生产性间充质干细胞

摘要

本发明提供用于治疗糖尿病患者特别是胰岛素缺乏型糖尿病患者的新治疗组合物，其包含从人脂肪组织获得的胰岛素生产性间充质干细胞以及造血干细胞。本发明还描述了用于从人脂肪组织分离、扩增和分化胰岛素生产性充质干细胞的简单高效的方法。此方法中使用完全无异种材料的培养基和脂肪组织的未过滤提取物；该方法也避免了对细胞进行连续传代。

主权项

用于从人脂肪组织中分离和分化胰岛素生产性间充质干细胞的方法，其包括以下步骤：a)将脂肪组织切成碎末，b)向上述组织中加入1型胶原酶，c)将由上获得的内含物置于培养器里的摇动器上，d)将步骤c获得的全部内含物离心，e)将离心后得到的上清液和沉淀物分别在含有“无异种材料的”增殖培养基的培养皿中在37℃和CO2气氛中培养约10天，所述增殖培养基由高葡萄糖DMEM(Dulbeccos改进的Eagles培养基)、人白蛋白、成纤维细胞生长因子、(FGF)、丙酮酸钠缓冲剂、抗生素和抗真菌剂组成，f)更新培养基但不进行连续传代，g)在9‑10天结束时通过胰酶消化收集上述细胞，h)检查所收集细胞的活力、无菌性、细胞计数以及CD45阴性、CD90/CD73阳性细胞的流式细胞术分析，i)使用分化培养基使所有细胞分化成胰岛素表达细胞，所述分化培养基由DMEM‑高葡萄糖、DMEM F12、烟酰胺、活化素A、Exendin 4、五肽胃泌素、HGF、h)B27、N2、血清添加物、抗生素和抗真菌剂组成，j)在至少3天后，使用常规技术分离步骤(i)的细胞，而后进行Pax‑6、Isl‑1、Ipf‑1/pdx‑1、C‑肽、胰岛素的测量、无菌性和活力测定。