沙雷氏菌WJ39菌株,由其获得的低温蛋白酶及其纯化方法

摘要

本发明公开了沙雷氏菌(Serratia sp.)WJ39菌株，以及从中获得的低温蛋白酶及其纯化方法。该方法包括发酵上清液的硫酸铵沉淀、用10KDa的超滤管进行离心浓缩，最后进行DEAE SepharoseTM FF阴离子交换层析，最终得到电泳纯的低温蛋白酶。本发明纯化的低温蛋白酶作用温度低、具有较宽的pH适应范围、较低的活化能，在洗涤剂、农业、环境、食品加工等领域蕴藏一定的应用潜力。

主权项

低温蛋白酶的纯化方法，以沙雷氏菌(Serratia sp.)WJ39菌株，菌种保藏号为GGMCC No.2638为原料，其步骤包括：(1)、制备粗酶液：沙雷氏菌(Serratia sp.)WJ39菌株的发酵培养条件为温度13℃，pH7.2，培养时间48小时，将发酵液离心，取上清即为粗酶液；(2)、硫酸铵沉淀：粗酶液加硫酸铵至30‑40％饱和度，离心取上清，继续加硫酸铵至60‑70％饱和度，离心弃上清，沉淀在50mM磷酸盐缓冲液，pH8.0中透析过夜；(3)、DEAE SepharoseTMFF阴离子交换层析：将透析的酶液离心弃杂质，上清进行浓缩，上样于用50mM，pH7.0‑8.0的磷酸盐缓冲液预平衡过的DEAE SepharoseTM FF阴离子交换层析柱，流速为0.4ml/min，NaCl浓度梯度为0.05mol/L、0.18mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L和1.0mol/L洗脱，收集洗脱峰，检测蛋白浓度及酶活性部分，用10KDa的浓缩管于4℃离心收集浓缩液透析过夜，即为纯酶，冷冻保存；将浓缩的样品进行SDS‑PAGE电泳分析，分离胶浓度为12.5％，浓缩胶浓度为5％，得到单一条带，表明纯化的低温蛋白酶已经达到电泳纯，分子量为47.6KDa。