从福尔马林固定的毛发干内抽提DNA的方法

摘要

本发明公开了一种从福尔马林固定的毛发干内抽提DNA的方法，将毛发干洗涤预处理后，0℃～10℃下把毛发干在装有0.01mmol/L的柠檬酸钠溶液的匀浆器内磨碎，沸水浴5～15min，修复毛发干；加乙醇静置、离心收集沉淀；向沉淀中加入头发消化液和蛋白酶K溶液，37℃～57℃水浴，持续消化1～2小时；消化完毕后提取DNA。本发明先对毛发干样品进行修复，使其蛋白质的活性位点的活性得以全部或部分恢复。此外，消化液的配制充分考虑毛发干裂解的特点，大大提高了毛发裂解效率，缩短了毛发消化的时间。本方法不仅可以用于福尔马林浸泡的毛发干内基因组的抽提，而且还可用于古毛发干内基因组的抽提。

主权项

一种从福尔马林固定的毛发干内抽提DNA的方法，其特征在于包含下列步骤：(1)毛发干预处理：取毛发干，充分洗涤除尽杂质，随后依次用质量浓度2.0％的NaOH与2.0％的HCl洗涤，之后用无菌蒸馏水多次漂洗，再依次用梯度酒精洗涤，无菌条件下晾干备用；(2)毛发干的修复处理：0℃～10℃下把毛发干在装有0.01mmol/L的柠檬酸钠溶液的匀浆器内磨碎，直到肉眼看不到毛发干碎片，转移研磨液至新的灭菌管中，沸水浴5～15min；自然降至室温后加入无水乙醇混匀，室温静置，离心，收集沉淀；(3)抽提DNA：向沉淀中加入头发消化液和蛋白酶K溶液，37℃～57℃水浴，持续消化1～2小时；消化完毕后以酚/氯仿/异戊醇方法提取DNA；所述头发消化液的成分如下：Tris‑Cl 10mmol/L  pH为8.0、NaCl 100mmol/L、CaCl21.0mmol/L、DTT 20～500mmol/L、SDS质量百分比含量0.5％～5.0％、Triton X‑100体积百分比含量0.5％～4.0％、其余为无菌双蒸水；蛋白酶K溶液的浓度为0.5mg～50mg/ml。