家蚕滞育品种的低温催青转基因方法

摘要

一种家蚕滞育品种的低温催青转基因方法。用特殊的催青条件改变家蚕滞育品种下一代蚕卵的化性，使特殊的催青条件下获得的当代家蚕滞育品种蚕蛾交配，产下非滞育的下一代蚕卵，最后参照非滞育家蚕卵胚胎显微注射的转基因方法进行转基因，从而巧妙地突破家蚕滞育品种转基因技术的障碍并有效制作转基因蚕。该方法直接采用生产中普遍使用的实用性家蚕滞育品种作为原始材料，可以避免漫长而繁琐的育种过程，直接利用转基因技术创造出各种性状优良的新的特殊家蚕品种，可大大缩短育种的周期，节约大量的人力和物力。

主权项

一种家蚕滞育品种的低温催青转基因方法，其特征在于依次通过下列步骤实现：(1)将家蚕滞育品种的蚕卵通过人工孵化处理后，置于15℃恒温、相对湿度75％的环境中催青至孵化，孵化的蚁蚕在常规条件下进行饲养；(2)在25℃的种茧保护温度下收集同时化蛾的雌雄蚕蛾，在25℃、弱光的条件下交配4h后拆对，并将雌蛾投放于上浆的蚕连纸上，在黑暗的环境中产卵，每间隔1h收集一次蚕卵，并将收集的蚕卵置于25℃的环境中保护；(3)将蚕卵连同蚕连纸片用自来水冲洗以后，于蒸馏水中浸泡2‑3min，而后用镊子将蚕卵转移至用75％酒精消毒的载玻片上，并按照蚕卵腹面向右的标准将其排列整齐，排列好的蚕卵置于35‑37％的甲醛蒸气中消毒5min；(5)以收集时间开始记时，于收集后3h‑6h用显微注射仪将10‑15nl、总浓度400ng/ul的转座载体质粒从蚕卵腹面中央注入已经消毒的蚕卵中，并用无毒的胶水封闭卵壳注射留下的小孔；(6)将注射完成的蚕卵在35‑37％的甲醛蒸气中消毒5min后，置于25℃、相对湿度85％以上的湿度条件下，进行催青直到孵化，饲养孵化出来的蚁蚕，将当代(G0)的蚕蛾进行自交或回交，获得G1代蚕卵，扫描G1代蚕卵获得转基因个体；最后，获得的转基因个体正常饲养、传代，即完成家蚕滞育品种的转基因蚕的制作。