奶牛和杂交牛脊椎畸形综合征PCR-RFLP检测方法

摘要

本发明属于动物疾病检测技术领域，具体涉及一种牛隐性遗传疾病脊椎畸形综合征(CVM)检测领域。其步骤如下：从被检牛样本中提取牛基因组DNA，根据牛SLC35A3基因序列，设计引入酶切位点的PCR扩增引物对，进行PCR反应，扩增产物用2.5％琼脂糖凝胶电泳进行检测，染色，在凝胶成像系统中观察条带，回收PCR产物进行酶切，反应完成后，在10％聚丙烯酰胺凝胶中电泳检测，根据扩增产物的条带分布情况判断所检样本的基因型。

主权项

一种检测牛隐性遗传疾病脊椎畸形综合征的组合物，其特征在于，包含下列试剂1)正向引物：5’GCTCTCCTCTGTAATCCCCA 3’，反向引物：5’CCACTGGAAAAACATGCTGTGAGTA 3’；2)限制内切酶Rsa3)10×酶切缓冲液4)10×buffer5)Tag酶6)d NTP7)双蒸水其使用方法如下：1)在一个反应总体积为25μL的PCR反应体系中的用量正向引物5’GCTCTCCTCTGTAATCCCCA 3’      1μL；反向引物5’CCACTGGAAAAACATGCTGTGAGTA 3’ 1μL；Tag酶(2U/μl)                            0.5μL；d NTP(10μM each)                        0.5μL；模板DNA                                  1.5μL；10×buffer                               2.5μL；双蒸水                                   18μL；2)PCR反应扩增程序：94℃变性3min，35次循环(94℃1min，65℃1min，72℃1min)，72℃延伸10min，得到PCR扩增产物；3)取步骤2)的PCR扩增产物16μL，加入5URsaI限制内切酶和2μL 10×酶切缓冲液，加水至20μL，在37℃下反应5h。