通过4轮连续PCR或阻断PCR或其全基因合成的方法进行的含有基因特异的条形码的粟酒裂殖酵母杂合缺失突变体的全基因组构建

摘要

提供用于制备基因靶向的杂合缺失粟酒裂殖酵母的方法，包括用缺失盒转化粟酒裂殖酵母，该缺失盒由4轮连续PCR、阻断PCR或全基因合成构建，含有同源重组位点。还提供了由该方法制备的基因靶向的杂合缺失粟酒裂殖酵母突变体，和基因靶向的杂合缺失粟酒裂殖酵母突变体文库。此外，该文库在构建用于筛选药物作用方式的方法和试剂盒中有用。

主权项

构建基因靶向的杂合裂殖酵母突变体的方法，包括将用于基因打靶的缺失盒导入到裂殖酵母菌株中，所述缺失盒包括选择性标记基因；用于微点阵的、分别定位于所述选择性标记基因两侧的一对基因特异的条形码碱基序列；和被分别分配到定位在所述选择性标记基因的上游和下游的所述条形码碱基序列侧面的一对同源重组区，其中每个同源重组区的长度大于150bp。