一种利用白桦悬浮培养生产齐墩果酸的方法

摘要

一种利用白桦悬浮培养生产齐墩果酸的方法。该方法是以白桦成树一年生枝休眠芽、展叶芽和种子为材料，接种于WPM+6-BA 1mg/L培养基中获得白桦无菌苗，再以无菌苗茎段和叶片为外植体，在培养基IS上诱导获得稳定、快速生长的愈伤组织，最后在B5培养基，激素为0.1～0.4mg/L6-BA和0.01～0.1mg/L TDZ的培养基中进行悬浮细胞系的培养，蔗糖为20g/L，pH值为6.0～6.5，接种量鲜重为30～50g/L。23～25℃，110～130转/min，光照8～10h/d，光照强度1400～1700Lx，15天继代1次，多次继代培养后获得稳定的白桦悬浮培养细胞系。经高效液相色谱法检测，获得的白桦悬浮培养细胞中齐墩果酸含量可达到0.217～0.714mg/g(干重)。本发明是第一次在白桦植物中通过细胞工程方法生产齐墩果酸，此方法周期短，成本低，能节省大量人力、物力、提高劳动生产率，为解决天然植物药物来源紧缺和工业化大规模生产齐墩果酸药物提供了一种新途径。

主权项

一种通过悬浮培养植物细胞生产齐墩果酸的方法，其特征在于包括以下步骤：1)通过常规方法培养获得白桦愈伤组织；2)将愈伤组织在接种于B5悬浮培养基上培养，接种量为3g～5g/100mL，250mL三角瓶，装100mL培养基，121℃高压蒸汽灭菌20min，旋转摇床中震荡培养，转速为转速120rpm/min，培养温度为24～26℃，光照强度1000～1500Lx，光/暗周期为16h/8h，湿度60％～70％；每个悬浮培养继代周期后，所述继代培养周期为15天，将培养物过筛，将单细胞和小细胞团，分装在含新鲜液体培养基的培养瓶中继续培养获得悬浮细胞系；3)步骤2)的培养基中添加了0.1～0.4mg/L的6‑BA和0.01～0.1mg/L的TDZ