检测底泥中荧光素双醋酸酯活性的方法

摘要

本发明公开了一种检测底泥中荧光素双醋酸酯活性的方法，包括：1)称取底泥样品，加入磷酸缓冲液振荡混匀；加入FDA溶液启动反应，振荡培养显色；2)培养结束后，立即加入氯仿/甲醇混合终止剂终止反应，充分振荡摇匀；3)将混合液离心后取上清液在490nm处测定吸光度；4)计算荧光素量，进而对FDA活性进行计算与单位标准化。在线性范围内选择适宜的培养时间，可以有效降低测定周期；能快速、有效终止荧光素显色反应，保证测定结果的准确、快速，重现性好；优化离心时间，保证获得FDA活性的最大值，客观、科学的表征底泥的FDA活性；定量、规范FDA表征单位，大大提高底泥FDA活性数据的规范化和可比性。

主权项

1.一种检测底泥中荧光素双醋酸酯活性的方法，其特征在于，包括步骤：A、反应启动与培养：称取底泥样品，加入磷酸缓冲液振荡混匀，并加入荧光素双醋酸酯溶液启动反应，包括振荡、培养、显色；B、反应终止：培养结束后，立即加入氯仿/甲醇混合终止剂终止反应，振荡摇匀；C、离心测定：将已终止反应并振荡后的混合液进行离心处理后，取上清液在490nm处测定吸光度；D、计算所述底泥中的荧光素量，进而对荧光素双醋酸酯的活性进行计算和对单位标准化，具体包括：标准曲线绘制：配制一系列浓度不同的荧光素标准溶液，于490nm处测定各荧光素标准溶液的吸光度abs，以所述各荧光素标准溶液的荧光素浓度与其所测得的吸光度值绘制标准曲线，并求得所述标准曲线的斜率b，并通过公式计算荧光素浓度：C_f＝abs×b；荧光素双醋酸酯溶液活性计算与单位标准化：将所述步骤C中的上清液在490nm处测定的吸光度根据所述荧光素标准曲线换算为荧光素浓度，再根据以下公式计算所述底泥的土壤荧光素双醋酸酯活性：式中：U_FDA为土壤荧光素双醋酸酯活性，单位：μg荧光素/g/min，以干重计；C_f为荧光素浓度，单位：μg/mL；V为所述步骤A中的混合溶液的总体积，单位：mL；m为所述底泥样品重量，单位：g，以干重为基准进行计算；t为所述步骤A中的培养时间，单位：min。