甘蔗细胞悬浮液制备方法

摘要

甘蔗细胞悬浮液制备方法，以甘蔗新叶作为外植体，采用三次固体培养基培养得到颗粒状甘蔗愈伤组织，甘蔗愈伤组织接种到N6液体培养基中，在转速为120rpm/min、温度为28℃的摇床上振荡培养12天后，将培养液中的悬浮液转接到离心管中，在转速为5000rpm的转速下离心20分钟，去除上清液；留下的离心沉积物转接到N6液体培养基中，在转速为120rpm/min、温度为28℃的摇床上振荡培养48小时，即可得到分散均匀的甘蔗细胞悬浮液；本发明简化了液体培养过程中多次更换液体培养基以达到细胞数量增殖的操作过程，缩短了液体振荡培养周期，不需要多次更换液体培养基，降低了材料因多次更换液体培养基导致污染的风险。

主权项

一种甘蔗细胞悬浮液制备方法，其特征在于：以甘蔗新叶作为外植体，采用三次固体培养基培养，取外植体接种于第一种培养基，在暗环境、温度28～30℃下培养15～20天，得到第一次由外植体分化的愈伤组织，将该愈伤组织继代培养，接种于第二种培养基中，在自然光、室温下培养25～30天，再将第二次得到的愈伤组织继代培养，接种于第三种培养基中自然光室温下培养25～30天，得到颗粒状甘蔗愈伤组织；颗粒状甘蔗愈伤组织接种到包含1mg/L2.4‑D和30g/L蔗糖的N6液体培养基中，在转速为120rpm/min、温度为28℃的摇床上振荡培养12天后，将培养液中的悬浮液转接到离心管中，在转速为5000rpm的转速下离心20分钟，去除上清液；留下的离心沉积物转接到包含1mg/L2.4‑D和30g/L蔗糖的N6液体培养基中，在转速为120rpm/min、温度为28℃的摇床上振荡培养48小时，即可得到分散均匀的甘蔗细胞悬浮液。