牙鲆弹状病毒的快速检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明公开一种牙鲆弹状病毒的快速检测试剂盒及其检测方法。本发明包括由Bst DNA聚合酶、逆转录酶、反应缓冲液、环介导等温扩增混合液、引物混合液和荧光显色剂共6种试剂组成的试剂盒，以及使用该试剂盒检测鱼类样品中牙鲆弹状病毒的一套检测操作程序，以实现对牙鲆弹状病毒快速检测的标准化，为鱼类的健康养殖和国际鱼类贸易的发展提供科学依据。本发明具有特异性好、灵敏度高、操作简便、高效等优点，可广泛的应用于水产养殖场以及进出口鱼类贸易中的现场即时检测，并可以为相关基础研究提供技术支持，具有广泛应用前景。

主权项

一种牙鲆弹状病毒的快速检测试剂盒，其特征在于试剂盒中包括试剂A‑F：试剂A：BstDNA聚合酶，8U/μL；试剂B：逆转录酶，200U/μL；试剂C：反应缓冲液，其中含有200mmol/LpH8.8的三羟基甲基氨基甲烷‑盐酸、100mmol/L氯化钾、100mmol/L硫酸铵、80mmol/L硫酸镁和1％曲拉通X‑100；试剂D：环介导等温扩增混合液，其中含有4.0μL2.5mmol/LdNTP、2.0μL 10mol/L甜菜碱、0.5μL200U/μL RNA酶抑制剂和4‑5μL分子生物学级超纯水；试剂E：引物混合液，其中含有2μL 20μmol/L正向内引物、2μL 20μmol/L反向内引物、1μL 5μmol/L正向外引物、1μL 5μmol/L反向外引物、1μL 20μmol/L正向环引物、1μL 20μmol/L反向环引物；其中引物序列分别如下：正向内引物：5′‑TTGGCCCCCAAAGAACCCTGTTTTGGGGAATACGTCCACAAG‑3′；反向内引物：5′‑GAGATGAAACTGGCCCCCAGGTTTTAGTACAGTGCTGAGGCTGT‑3′；正向外引物：5′‑GGGAACAATCTTGGGGACAT‑3′；反向外引物：5′‑CATTGGCACCTTGGAGCT‑3′；正向环引物：5′‑AACATGTGGTTCGGTAAAGGAC‑3′；反向环引物：5′‑GTGGGAGTGTATGACACCACG‑3′。试剂F：荧光显色剂，成分为100×的荧光染料SYBR GREEN I。