萘双加氧酶植物表达载体及其构建方法和应用

摘要

本发明公开了一种萘双加氧酶表达载体pYPXnahA及其构建方法，通过携带有该载体的农杆菌转化的植物能持续表达萘双加氧酶，并能促使植物参与萘的降解，从而可以为植物修复萘污染提供有益的帮助。为这方面的植物品种提供了新选择，克服了对特定植物单独或与微生物相组合实现土壤植物修复的依赖。

主权项

一种萘双加氧酶植物表达载体，其特征在于，在pYPX245植物表达载体的BamHI和SacI酶切位点之间插入NahA融合基因编码序列；所述的NahA融合基因为口蹄疫病毒2A蛋白与萘双加氧酶四个亚基以NahAa‑2A蛋白‑NahAb‑2A蛋白‑NahAc‑2A蛋白‑NahAd的串联方式而成；所述的萘双加氧酶四个亚基的核苷酸序列分别为：萘双加氧酶a亚基NahAa的核苷酸序列如SEQ.ID No.1所示：5′ATGGAATTGTTGATTCAACCAAACAATCGCTTGATTTCTTTTAGTCCAGGTGCCAACTTGTTGGAAGTTTTGCGTGAAAATGGTGTTGCTATTTCTTACTCTGGTATGTCTGGTCGTTGCGGTACTTGCCGTTGTCGTGTTACTGATGGTCTGGTAATTGATTCTGGTGCTGGATCTGGTTTGCCAAACTTGGTAGATGAGCATTATGTTTTGGCTTGTCAATCTGTTTTGACTCATAATTGTGCTATCGAAATCCCAGAAACTGATGAAATCGTTACTCATCCAGCTCGTATCATCAAGGGTACTGTTGTTGCTGTTGAGTCTCCAACTCATGATATCCGTCGTTTGCGTGTACGTTTGGCTAAGCCATTCGAGTTCTCTCCAGGTCAATATGCTACATTGCAGTTCTCTCCAGAGCATGCTCGTCCGTATTCAATGGCTGGTTTGCCAGATGATCAAGAAATGGAGTTCCACATACGCAAGGTTCCAGGTGGTCGTGTAACTGAGTATGTTTTCGAGCATGTTCGTGAAGGTACTTCTATCAAGTTGTCTGGTCCATTGGGTACGGCTTATTTGCGTCAGAACCATACCGGTCCAATGTTGTGTGTTGGTGGTGGGACTGGTTTGGCTCCAGTGTTGTCGATTGTTCGTGGTGCTTTGAAGTTGGGTATGACAAACCCCATCTTGTTGTATTTCGGTGTTCGCTCTCAGCAAGATTTGTACGATGCTGAGCGTTTGCATAAATTGGCTGCTGATCATCCACAACTGACTGTTCATACTGTTATTGCTATGGGTCCAATTAATGAGTCTCAACGTGCTGGTTTGGTTACTGATGTTATCGAAAAAGACATCATTTCTTTGGCTGGGTGGCGTGCTTACTTGTGTGGTGCACCAGCAATGGTTGAAGCGTTGTGCACCGTTACCAAGCATCTTGGAATATCTCCAGAACATATTTATGCCGATGCCTTCTATCCTGGTGGAATCTGA 3′萘双加氧酶b亚基NahAb的核苷酸序列如SEQ.ID No.2所示：5′ATGACTGAAAAATGGATTGAAGCAGTTGCTTTGTCTGATATCCCAGAAGGTGATGTTTTGGGTGTAACTGTAGAGGGCAAGGAGTTGGCTTTGTACGAAGTGGAAGGTGAAATCTACGCTACCGACAACTTGTGCACGCATGGTGCTGCTCGCATGTCTGATGGTTATTTGGAGGGTCGAGAAATCGAATGCCCATTGCATCAAGGTCGTTTTGACGTTTGTACAGGCAGAGCCTTGTGTGCTCCAGTGACAGAGAACATCAAAACATATGCAGTCAAGATTGAGAACTTGCGTGTAATGATTGATTTGTCTGGTGAGTTTTAA 3′萘双加氧酶c亚基NahAc的核苷酸序列如SEQ.ID No.3所示：5′ATGAACTACAAGAACAAGATCTTGGTATCTGAATCTGGTTTGACTCAAAAGCACTTGATTCATGGTGATGAAGAATTGTTCCAGCACGAATTGAGAACTATCTTCGCTCGTAACTGGTTGTTCTTGACTCATGATTCTTTGATTCCATCTCCAGGTGATTATGTTACCGCAAAGATGGGTATCGACGAGGTAATCGTTTCTCGTCAGTCTGATGGTTCGATTCGTGCATTCTTGAACGTTTGTCGTCACCGTGGTAAGACGTTGGTTAACGCTGAAGCTGGTAACGCAAAGGGTTTCGTTTGCTCTTACCATGGTTGGGGTTTCGGTTCCAATGGTGAGTTGCAGTCTGTTCCATTCGAGAAGGAGTTGTACGGTGAGTCTTTGAACAAGAAGTGTTTGGGTTTGAAGGAAGTTGCTCGTGTTGAGTCTTTCCATGGTTTCATCTATGGTTGCTTCGATCAGGAGGCTCCACCATTGATGGATTACTTGGGTGATGCTGCTTGGTACTTGGAGCCAATCTTCAAGCATTCTGGTGGTTTGGAACTGGTCGGTCCACCAGGCAAGGTTGTTATCAAGGCTAACTGGAAGGCACCAGCTGAAAACTTCGTGGGTGATGCATACCACGTGGGTTGGACGCACGCGTCTTCTTTGCGTTCTGGAGAGTCTATCTTCGCTTCTTTGGCTGGTAACGCTGTTCTGCCACCAGAAGGTGCAGGTTTGCAAATGACTTCCAAGTATGGTTCTGGCATGGGTGTGTTGTGGGATGGTTACTCTGGTGTTCATTCTGCAGATTTGGTTCCAGAGTTGATGGCATTCGGTGGTTCTAAGCAGGAGAGGTTGAACAAGGAGATCGGTGATGTTCGTGCTCGTATCTATCGTTCTCACCTCAACTGCACCGTTTTCCCAAACAACTCTATGTTGACCTGCTCTGGTGTTTTCAAGGTATGGAACCCAATCGATGCAAACACTACCGAGGTCTGGACCTACGCAATCGTTGAGAAGGATATGCCAGAGGATTTGAAGCGTCGTTTGGCAGATTCTGTACAGCGTACGTTCGGTCCAGCTGGTTTCTGGGAGTCTGATGACAACGACAACATGGAGACTGCTTCTCAAAACGGCAAGAAGTACCAATCTCGTGATTCTGATTTGTTGTCAAACTTGGGTTTCGGTAAGGATGTATACGGTGATGCTGTTTACCCAGGTGTTGTTGGTAAGTCTGCAATCGGTGAGACTTCTTATCGTGGTTTCTATCGTGCTTACCAGGCTCACGTTTCTTCTTCCAACTGGGCTGAGTTCGAGGATGCTTCTTCTACTTGGCATACTGAGTTGACGAAGACTACTGATCGTTAA 3′萘双加氧酶d亚基NahAd的核苷酸序列如SEQ.ID No.4所示：5′ATGATGATCAACATCCAAGAAGACAAGCTGGTCTCTGCTCACGATGCTCAAGAGTTCTTGCGTTTCTTCAATTGCCACGACGCTGCTTTGCAACAAGAAGCTACCACGCTGCTGAACCGGGAAGCGCATTTGTTGGACATTCAGGCTTACCGTGCTTGGTTGGAGCACTGCGTTGGTTCTGAGGTTCAATACCAGGTCATTTCACGCGAACTGCGTGCTGCTTCTGAGCGTCGTTACAAGTTGAATGAAGCCATGAACGTTTACAACGAGAACTTTCAGCAATTGAAAGTTCGTATCGAGCATCAACTTGATCCACAAAACTGGTCTAACTCTCCAAAGTTGCGTTTCACTCGTTTCATCACCAATGTCCAGGCTGCACGTGATGTAGATGACGAAGAGTTGTTGCACATCCGCTCTAACGTCATCTTGCACCGTGCACGTCGTGGCAATCAGGTAGATGTATTCTACGCTGCTCGTGAAGACAAGTGGAAACGTGGTGAAGGTGGTGTTCGAAAGTTGGTCCAGCGATTCGTGGATTACCCAGAGCGTATATTGCAGACGCACAACTTGATGGTCTTCTTGTGA 3’；所述的口蹄疫病毒2A蛋白基因序列如SEQ.ID No.5所示：CTGTTGAATTTCGATCTTCTTAAGCTTG CTGGTGATGTTGAATCCAACCCAGGTCCA。