细菌革兰双检实时荧光定量PCR检测试剂盒及用途

摘要

本发明提供一种革兰双检实时荧光定量PCR检测试剂盒，由定量PCR反应液1、革兰阳性标准品2、革兰阴性标准品3、阳性对照品4、阴性对照品5、细菌DNA抽提裂解液6、盒体8组成。盒体8设有容器孔，分别放置PCR反应液管、标准品、对照品、细菌DNA抽提裂解液。本发明试剂盒设计合理，运用实时荧光定量PCR技术，采用细菌通用引物和革兰阴、阳性双特异荧光探针，通过实时荧光定量，不仅进行细菌革兰阴、阳性菌分型，而且对检测的阴、阳性菌进行实时准确定量，可在检测细菌革兰阴、阳性菌DNA中应用。

主权项

细菌革兰双检实时荧光定量PCR检测试剂盒，由定量PCR反应液、革兰阳性标准品(2)、革兰阴性标准品(3)、阳性对照品(4)、阴性对照品(5)、细菌DNA抽提裂解液(6)、盒体(8)组成，盒体(8)设有容器孔，分别放置PCR反应液管(1)、革兰阳性标准品(2)、革兰阴性标准品(3)、阳性对照品(4)、阴性对照品(5)、细菌DNA抽提裂解液(6)，定量PCR反应液由单管分装，矩阵排列，其中定量PCR反应液含有PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs、细菌检测用上游引物、检测用下游引物、荧光探针、耐热DNA聚合酶，革兰阳性标准品序列为：CAACGCGAAG AACCTTACCA AATCTTGACA TCCTTTGACA ACTCTAGAGATAGAGCCTTC CTCTTCGGGG GACAAAGTGA CAGGTGGTGC ATGGTTGTCGTCAGCTCGTG TCGTGAGATG TTGGGTTAAG TCCCGCAACG AGCGCAACCCTTAAGCTTAG TTGCCATCAT TAAGTTGGGC ACTCTAAGTT GACTGCCGGTGACAAACCGG AGGAAGGTGG GGATGACGT革兰阴性标准品序列为：CAACGCGAAG AACCTTACCT GGTCTTGACA TCCACAGAAC TTTCCAGAGATGGATTGGTG CCTTCGGGAA CTGTGAGACA GGTGCTGCAT GGCTGTCGTCAGCTCGTGTT GTGAAATGTT GGGTTAAGTC CCGCAACGAG CGCAACCCTTATCCTTTGTT GCCAGCGGTC CGGCCGGGAA CTCAAAGGAG ACTGCCAGTGATAAACTGGA GGAAGGTGGG GATGACGT细菌DNA抽提裂解液(6)含有10mmol/L Tri-HCl、pH 7.6、5mmol/L乙二胺四乙酸二钠、0.5％十二烷基硫酸钠，细菌DNA抽提裂解液(6)和定量PCR反应液都用0.22μm膜过滤预处理，其特征在于：上游引物序列为：5`-CAACGCGAAGAACCTTACC-3`下游引物序列为：5′-ACGTCATCCCCACCTTCC-3′革兰阳性探针为：5`-FAM-ACGACAACCATGCACCACCTG-TAMRA-3`革兰阴性探针为：5`-HEX-CAACATTTCACAACACGAGCTG-TAMRA-3`。