| 摘要 |
1. Способ оценивания целостности ДНК микроорганизмов, предусматривающий стадии ! a) иммобилизации микроорганизма на предметном стекле, без фиксации, посредством включения его в инертную среду; ! b) обработки лизисным раствором, содержащим ионогенный денатурирующий белок детергент, для экстракции клеточных стенок, мембран и белков; ! c) стабилизации ДНК-нуклеоида микроорганизма на предметном стекле, сухим нагреванием, инкубированием этого предметного стекла с лизированной пробой в микроволновой печи и ! d) окрашивания и оценивания целостности ДНК. ! 2. Способ по п.1, в котором ионогенный детергент является детергентом, выбранным из группы, состоящей из додецилсульфата натрия (ДСН), алкилбензолсульфата, лаурилсаркозина (саркозила), гидратированной соли гликолевой кислоты и их смесей. ! 3. Способ по п.2, в котором ионогенным детергентом является предпочтительно додецилсульфат натрия (ДСН). ! 4. Способ по любому из пп.1-3, в котором лизисный раствор содержит 0,001-2 М дитиотреитол (ДТТ); 0,001-2 М 2-амино-2-(гидроксиметил)-1,3-пропандиол (Трис); 0,001-2 М этилендиаминтетрауксусную кислоту (ЭДТА) и 0,1-3% додецилсульфат натрия (ДСН). ! 5. Способ по п.4, в котором рН лизисного раствора доводят до 6,5-10,5. ! 6. Способ по п.4, в котором лизисный раствор предпочтительно содержит 0,1 М дитиотреитол (ДТТ); 0,01 М (гидроксиметил)-1,3-пропандиол (Трис); 0,05 М этилендиаминтетрауксусную кислоту (ЭДТА) и 2% додецилсульфат натрия (ДСН). ! 7. Способ по п.6, в котором рН лизисного раствора доводят до приблизительно 10 с помощью NaOH. ! 8. Способ по п.1, в котором окрашивание на стадии d) проводят раствором флуорохрома. ! 9. Способ по п.1, в котором пробу, содержащую микроорганизмы, включаю |
