| 主权项 |
一种可同时监别B型肝炎病毒标的核酸之单一核酸多型及定量该标的核酸之方法，其包括：提供第一探针及第二探针，其中该第一探针系与该标的核酸之第一序列相同或互补且包含一与单一核酸多型相对应的硷基，该第一探针之核酸序列为序列编号：7之序列；其中该第二探针系与该标的核酸之第二序列相同或互补，且不包含与单一核酸多型相对应的硷基，该第二探针之核酸序列为序列编号：8之序列；藉由聚合酵素连锁反应(PCR)以一对引子来复制增量该标的核酸，以形成一包含该第一序列及该第二序列的双股核酸，该对引子之其中一者的核酸序列为序列编号：5之序列，以及该对引子之另一者的核酸序列为序列编号：6之序列；于反应液中将该核酸产物分别与该第一探针及第二探针杂合，以分别形成第一双股及第二双股，其中该第一探针系共价连结于一第一萤光标定物，该第二探针系共价连结于一第二萤光标定物，其中该第一萤光标定物及该第二萤光标定物中之一者为萤光施体，另一者为萤光受体，使得当该第一探针及第二探针与该标的核酸产物杂合时，该萤光施体与该萤光受体系处于邻近位置，且其两者之间能够进行萤光共振能量转移(FRET)；加热该反应液，使得其温度高于该第一探针及其互补序列所形成之双股核酸的分离温度；监别该单一核酸多型，其系以一激发光照射该萤光施体，并测量该第一探针之萤光受体发出之萤光量的变化，该萤光量变化系与其所升高的温度值相关；藉由测量该萤光受体所发出之萤光来定量该标的核酸。如申请专利范围第1所述之方法，其中该定量步骤系将该萤光受体所发出的萤光强度值与一预定值比较。如申请专利范围第2项所述之方法，其中该第一探针及该第二探针系杂合于该核酸产物的同一股上。如申请专利范围第1项所述之方法，其中该第一探针及该第二探针系杂合于该核酸产物的同一股上。如申请专利范围第4项所述之方法，其中该监别步骤系包含：建立该第一双股的一阶导函数分离曲线；决定该曲线之分离峰值所对应的温度值；比对该温度值与该双股的分离温度，其中该双股系由该第一探针与其互补序列形成，若该温度值较该分离温度低时，该标的核酸中存在一单一核酸多型，若该温度值与该分离温度相同时，则不存有单一核酸多型。如申请专利范围第1项所述之方法，其中该监别步骤系包含：建立该第一双股的一阶导函数分离曲线；决定该曲线之分离峰值所对应的温度值；比对该温度值与该双股的分离温度，其中该双股系由该第一探针与其互补序列形成，若该温度值较该分离温度低时，该标的核酸中存在一单一核酸多型，若该温度值与该分离温度相同时，则不存有单一核酸多型。如申请专利范围第6项所述之方法，其中该定量步骤系将该萤光受体所发出的萤光强度值与一预定值比较。如申请专利范围第7项所述之方法，其中该第一探针及该第二探针系杂合于该核酸产物的同一股上。一种可同时监别B型肝炎病毒标的核酸之单一核酸多型及定量该标的核酸之方法，其包括：提供第一探针及第二探针，其中该第一探针系与该标的核酸之第一序列相同或互补且包含一与单一核酸多型相对应的硷基，该第一探针之核酸序列为序列编号：21之序列；其中该第二探针系与该标的核酸之第二序列相同或互补，且不包含与单一核酸多型相对应的硷基，该第二探针之核酸序列为序列编号：22之序列；藉由聚合酵素连锁反应(PCR)以一对引子来复制增量该标的核酸，以形成一包含该第一序列及该第二序列的双股核酸，该对引子之其中一者的核酸序列为序列编号：20之序列，以及该对引子之另一者的核酸序列为序列编号：6之序列；于反应液中将该核酸产物分别与该第一探针及第二探针杂合，以分别形成第一双股及第二双股，其中该第一探针系共价连结于一第一萤光标定物，该第二探针系共价连结于一第二萤光标定物，其中该第一萤光标定物及该第二萤光标定物中之一者为萤光施体，另一者为萤光受体，使得当该第一探针及第二探针与该标的核酸产物杂合时，该萤光施体与该萤光受体系处于邻近位置，且其两者之间能够进行萤光共振能量转移(FRET)；加热该反应液，使得其温度高于该第一探针及其互补序列所形成之双股核酸的分离温度；监别该单一核酸多型，其系以一激发光照射该萤光施体，并测量该第一探针之萤光受体发出之萤光量的变化，该萤光量变化系与其所升高的温度值相关；藉由测量该萤光受体所发出之萤光来定量该标的核酸。如申请专利范围第9项所述之方法，其中该监别步骤系包含：建立该第一双股的一阶导函数分离曲线；决定该曲线之分离峰值所对应的温度值；比对该温度值与该双股的分离温度，其中该双股系由该第一探针与其互补序列形成，若该温度值较该分离温度低时，该标的核酸中存在一单一核酸多型，若该温度值与该分离温度相同时，则不存有单一核酸多型。如申请专利范围第10项所述之方法，其中该定量步骤系将该萤光受体所发出的萤光强度值与一预定值比较。如申请专利范围第11项所述之方法，其中该第一探针及该第二探针系杂合于该核酸产物的同一股上。一种引子，其系用来将B型肝炎病毒之标的核酸复制放大，该引子之核酸序列为序列编号：5之序列。一种引子，其系用来将B型肝炎病毒之标的核酸复制放大，该引子之核酸序列为序列编号：20之序列。一种引子，其系用来将B型肝炎病毒之标的核酸复制放大，该引子之核酸序列为序列编号：6之序列。一种探针，其包含与多个单一核酸多型相对应的硷基，用以监别B型肝炎病毒标的核酸中单一核酸多型，该探针之核酸序列为序列编号：7之序列。一种探针，其包含与多个单一核酸多型相对应的硷基，用以监别B型肝炎病毒标的核酸中单一核酸多型，该探针之核酸序列为序列编号：21之序列。一种探针，其用以监别B型肝炎病毒标的核酸中单一核酸多型，该探针之核酸序列为序列编号：8之序列。一种探针，其用以监别B型肝炎病毒标的核酸中单一核酸多型，该探针之核酸序列为序列编号：22之序列。一种试剂组，其可同时监别B型肝炎标的核酸之单一核酸多型及定量该标的核酸，该试剂组系包含：如申请专利范围第13项所述之引子；如申请专利范围第15项所述之引子；如申请专利范围第17项所述之探针；以及如申请专利范围第19项所述之探针。 |
