一种螺旋藻藻胆蛋白α亚基全蛋白基因及其编码蛋白

摘要

本发明涉及一种螺旋藻藻胆蛋白α亚基全蛋白基因及其编码蛋白和含有螺旋藻藻胆蛋白α亚基全蛋白基因的重组载体，提供了一种螺旋藻藻胆蛋白α亚基全蛋白基因，编码的螺旋藻藻胆蛋白α亚基全蛋白，其氨基酸序列，还提供一种含有螺旋藻藻胆蛋白α亚基全蛋白基因的重组载体和该重组载体构建的大肠杆菌表达载体。本发明采用现代生物技术，从藻泥克隆出螺旋藻藻胆蛋白α亚基基因，构建了微生物表达载体，再将该表达载体转至表达量高，易于纯化以及容易适应大规模工业化发酵生产的大肠杆菌中，构建高分泌型工程菌，可实现高效、低成本的藻胆蛋白α亚基全蛋白生产。

主权项

一种螺旋藻藻胆蛋白α亚基全蛋白表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)获得螺旋藻藻胆蛋白α亚基质粒：从新鲜藻泥中提取螺旋藻基因组DNA，以其为模板，用PCR扩增出螺旋藻藻胆蛋白α亚基基因的核苷酸序列；将该基因连接到pMD19-T Simple Vector上，将其转化到大肠杆菌DH5α，提取质粒pMD19-cpcA，经BamHI和SacI酶切得到脱辅基藻胆蛋白α亚基基因，与经同样双酶切的表达质粒pETDuet-1连接得到pETDuet-2；(b)构建螺旋藻藻胆蛋白α亚基、裂合酶E表达载体：以螺旋藻基因组DNA为模板，用PCR扩增出裂合酶E基因，扩增片断经SacI和SalI酶切后，将裂合酶E基因连接到经同样双酶切的pETDuet-2上，得到表达载体pETDuet-3；(c)构建螺旋藻藻胆蛋白α亚基、裂合酶E/F表达载体：以螺旋藻基因组DNA为模板，用PCR扩增出裂合酶F基因，扩增片断经SalI和NotI酶切后，将裂合酶F基因连接到经同样双酶切的pETDuet-3上，得到表达载体pETDuet-4；(d)构建藻胆蛋白α亚基、裂合酶E/F、血红素氧化酶表达载体：以螺旋藻基因组DNA为模板，用PCR扩增出血红素氧化酶基因hox1，扩增片断经NdeI和BglII酶切后，将血红素氧化酶基因连接到经同样双酶切的pETDuet-4上，得到表达载体pETDuet-5；(e)构建螺旋藻藻胆蛋白α亚基全蛋白表达载体：以螺旋藻基因组DNA为模板，用PCR扩增出藻胆素合成酶基因pcyA，扩增片断经BglII和KpnI酶切后，将藻胆素合成酶基因连接到经同样双酶切的pETDuet-5上，得到表达载体pETDuet-6。