用真核表达系统制备泛素结合酶UbcH10的方法

摘要

本发明属于医学研究领域，特别涉及一种用真核表达系统制备泛素蛋白质降解系统中的泛素结合酶UbcH10的方法。本研究中制备的UbcH10蛋白，为今后进一步研究泛素结合酶UbcH10在肿瘤发生、发展中的作用机理奠定了研究基础，采用杂交瘤技术获得UbcH10特异性单克隆抗体或免疫动物获得多价特异性抗血清，可为肿瘤的基因诊断提供方便。

主权项

一种用真核表达系统制备泛素结合酶UbcH10的方法，其特征在于：主要包括如下步骤：(1)从大肠癌组织中提取基因组总RNA，以此为模板通过RT-PCR扩增泛素结合酶UbcH10，并将其构建至克隆载体pMD18-T中；(2)通过EcoR I和HindI II双酶切构建成重组表达载体pcDNA3.1-UbcH10；(3)重组质粒经酶切和序列测定后，转染大肠癌细胞株LoVo，进行Western-blot分析检测；(4)经Western-blot分析表明构建的重组表达载体pcDNA3.1-UbcH10能在真核表达细胞中高表达UbcH10蛋白。