一种检测人6种免疫相关基因的标签单核苷酸多态性位点方法

摘要

本发明提供一种检测人6种免疫相关基因的标签单核苷酸多态性位点方法，它运用多重PCR-荧光标记单碱基延伸-标签微阵列杂交基因分型技术结合GenomeLabTMSNPstream基因分型系统同时检测上述6个基因27个标签单核苷酸多态性位点，具体方法包括基因组DNA提取、候选基因标签单核苷酸多态性位点的筛选、单核苷酸多态性位点扩增引物及延伸引物设计与合成、单重PCR验证单核苷酸多态性位点扩增引物质量、单核苷酸多态性位点检测样本的制备及检测、数据分析、方法稳定性评价。本发明具有高通量、高精确度、高通用性、简便、经济、可进行自动化检测的优点，可用于上述免疫相关基因在健康人的遗传特点或其与各种疾病遗传易感性的关联研究。

主权项

一种检测人6种免疫相关基因的标签单核苷酸多态性位点方法，这些基因及标签单核苷酸多态性位点为：补体受体1型基因：rs3818361、rs9429945、rs4844600、rs17048010、rs11118167；达菲抗原/趋化因子受体基因：rs863002；白细胞分化抗原59基因：rs1546727、rs831629、rs10768024、rs2231454、rs11585、rs1738548、rs12576440；白细胞分化抗原4基因：rs11064410、rs2255301、rs1075835、rs1075838、rs11064404、rs3213427、rs1055141、rs3213426；白细胞分化抗原8A基因：rs3020729；白细胞分化抗原8B基因：rs4832054、rs12477946、rs13024609、rs6722860、rs13400210，其特征在于检测方法包括如下步骤：(1)挑选各基因的标签单核苷酸多态性位点，确定延伸试剂类型，并对初选单核苷酸多态性位点进行评价、调整；(2)设计单核苷酸多态性位点扩增引物及延伸引物，委托公司合成；(3)制备人全血基因组DNA样本；(4)单重PCR验证单核苷酸多态性位点扩增引物质量；(5)通过多重PCR-荧光标记单碱基延伸-标签微阵列杂交反应制备供基因分型系统检测单核苷酸多态性位点用的样本；(6)采用基因分型系统检测样本单核苷酸多态性位点；(7)采用基因分型系统软件分析单核苷酸多态性位点分型效果，去除分型成功率＜90％的单核苷酸多态性位点，并利用分型成功率＞90％的单核苷酸多态性位点确定个体基因型；(8)对多个DNA样本单核苷酸多态性位点重复检测，计算分型符合率，以评价方法的稳定性。