表达纯化猪α-干扰素的基因工程菌株构建

摘要

本发明涉及表达猪α-干扰素的基因工程菌株的构建方法。本发明利用蛋白phasin与PHB特异结合的特性，将phasin、内含肽和目的蛋白融合表达，融合蛋白表达后，在工程菌株体内与PHB特异性结合；由于PHB颗粒重力较大，通过简单离心即可携带融合蛋白与杂质分离，除去杂质后，通过改变PHB亲和体的悬浮液温度、pH值，促使已经突变了的内含肽N末端不发生自动切割，C末端发生自动切割，释放目的蛋白至溶液，达到纯化目的蛋白的目标。利用构建的体系，蛋白质表达和纯化同时进行，从而节约了时间，降低了成本，并且可以保证大部分蛋白质的活性结构，操作步骤简单适于工业生产。

主权项

一种在原核生物中表达猪α干扰素的方法，其特征在于构建的基因工程菌中同时实现猪α干扰素蛋白的表达和纯化。首先是通过定点突变PCR获得编码猪α干扰素成熟蛋白的基因序列，连接在融合标签基因phasin和自切割蛋白基因intein的下游，构建了表达质粒；将其与编码并累积的亲和介质PHB的质粒共转化表达细菌中；在改良的培养液中诱导表达，并诱导phasin蛋白与PHB颗粒亲和；分离亲和后的PHB颗粒并在一定条件下诱导内含肽intein的C端特异断裂，释放目标蛋白，从而达到表达和纯化同步。