一种百菌清抗原、抗体制备方法及其残留ELISA检测方法

摘要

一种百菌清抗原、抗体制备方法及其残留ELISA检测方法，是以百菌清作为起始反应物，以氨基取代4位氯原子；并采用1’1-羰基咪唑法制备其人工抗原，通过免疫新西兰大白兔获得兔抗百菌清多克隆抗体，用酶联免疫吸附法(ELISA)测定其抗血清效价可达1∶5.12×104，并以此建立百菌清残留检测的ELISA方法，方法最低检测浓度0.383ng/mL。

主权项

一种杀菌剂百菌清的人工抗原制备新方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将百菌清充分溶解于二氯甲烷，再向其中加入与百菌清和乙二胺的摩尔比为1∶0.5-1的乙二胺-水混合液，20-25℃下缓慢搅拌22-24h；(2)反应结束后，分离二氯甲烷层，水洗二氯甲烷层3-5次，蒸发去除二氯甲烷后，得黄绿色晶体，为目标半抗原；(3)将(2)获得的半抗原用DMF溶解，再向其中加入同样用DMF溶解的等摩尔的1’1-羰基咪唑，20-25℃下搅拌2-3h，将混合体系缓慢滴加到用碳酸盐缓冲液(CBS)溶解的牛血清蛋白(BSA)/卵清蛋白(OVA)溶液中，搅拌4-6h；离心20-30min(6000r/min)弃沉淀，上清采用8000-14000MW透析膜/袋进行透析，冻干后，即得人工免疫抗原/人工包被抗原。