发明名称 | 兔膝关节软骨单位体外酶解消化获取的实验方法 | ||
摘要 | 本发明属于组织工程化软骨体外构建的技术领域,具体涉及一种兔膝关节软骨单位体外酶解消化获取的实验方法。其步骤如下:留取兔膝关节,将关节软骨反复剪成碎片组织,冲洗,弃上清,放置于无菌锥形瓶备用;采用dispase酶和II型胶原酶按12mL DMEM-F12培养液/g软骨加入上述锥形瓶内,搅拌,消化,形成消化悬液;将消化悬液过滤、离心,加入原代软骨细胞培养液,制成无菌的软骨单位悬液。本发明的有益效果:获取方法简单,重复性好;更加符合软骨细胞在体内的生长环境及生物学特性;软骨单位较单纯细胞相比生物力学特性明显提高,改善了软骨细胞作为种子细胞生物力学特性较差的缺点。 | ||
申请公布号 | CN101831402A | 申请公布日期 | 2010.09.15 |
申请号 | CN201010146940.3 | 申请日期 | 2010.04.12 |
申请人 | 山西医科大学第二医院;卫小春 | 发明人 | 卫小春;段王平;孙振伟;李琦 |
分类号 | C12N5/077(2010.01)I | 主分类号 | C12N5/077(2010.01)I |
代理机构 | 山西太原科卫专利事务所 14100 | 代理人 | 张彩琴;任林芳 |
主权项 | 一种兔膝关节软骨单位体外酶解消化获取的实验方法,其特征在于步骤如下:(1)、无菌条件下留取兔膝关节,在超净工作台内将膝关节打开,刮取膝关节股骨和胫骨平台全层软骨,将关节软骨反复剪成碎片组织,无菌D-Hanks液冲洗,弃上清,称重,放置于无菌锥形瓶备用;(2)、采用dispase酶和II型胶原酶按12mL DMEM-F12培养液/g软骨加入上述锥形瓶内,即每克软骨加入DMEM-F12培养液12mL,DMEM-F12培养液中含有质量/体积浓度为0.3%的dispase酶和质量/体积浓度为0.2%的II型胶原酶,上述两种酶均采用无菌DMEM-F12培养液溶解,经过0.22μm一次性过滤器过滤、除菌,加入培养液的锥形瓶放置于37℃5%CO2培养箱中磁力搅拌器上,慢速搅拌,进行联合酶解搅拌消化3h,形成消化悬液;(3)将上述消化悬液用100μm细胞筛网过滤于离心管中,1200rpm离心5min,弃上清,然后10mL无菌DMEM-F12培养液反复冲洗、离心3次,加入原代软骨细胞培养液10mL,原代软骨细胞培养液包括DMEM-F12培养基9mL及肽牛血清1mL,制成无菌的软骨单位悬液。 | ||
地址 | 030001 山西省太原市五一路382号 |