一种测定低乳糖牛奶中乳糖水解率的方法

摘要

本申请公开了一种测定低乳糖牛奶中乳糖水解率的方法，更具体而言，涉及采用本申请所述的葡萄糖氧化酶-分光光度法测定低乳糖牛奶的乳糖水解率的方法；该方法包括(a)测定牛奶水解后的乳糖浓度；(b)测定牛奶水解前的乳糖浓度；(c)计算乳糖水解率， 本发明的检测方法速度快、费用低、准确度高。

主权项

1.一种低乳糖牛奶中乳糖水解率的测定方法，其特征在于，该方法包括：(a).测定低乳糖牛奶水解后的乳糖浓度；(b).测定低乳糖牛奶水解前的乳糖浓度；(c).计算乳糖水解率其中，步骤(a)中，首先给乳糖水解牛奶中加入混合试剂沉淀蛋白制备样品A；然后，吸取等体积的标准葡萄糖溶液和样品A，加入到由酶试剂与酚试剂混合组成的工作液中；在30℃-40℃下反应一段时间；于500-520nm的紫外可见分光光度计下测定其吸光度值，根据标准葡萄糖溶液浓度，计算样品的葡萄糖浓度，再根据该浓度计算出水解的乳糖浓度；步骤(b)中，首先制备乳糖完全水解牛奶：每升低乳糖牛奶中加入5000-10000NLU的乳糖酶，在30℃-40℃的水浴中反应一段时间，该量及反应时间确保低乳糖牛奶中未水解的乳糖完全水解；然后，加入混合试剂，制备样品B；再吸取等体积的标准葡萄糖溶液和样品B，加入到酶试剂与酚试剂混合组成的工作液中；在30℃-40℃下反应一段时间；于500-520nm的紫外可见分光光度计下测定其吸光度值，根据标准葡萄糖溶液浓度，计算样品的葡萄糖浓度，再根据该浓度计算出水解前的乳糖的浓度，乳糖浓度和葡萄糖浓度的单位均为g/L；其中所述的混合试剂为试剂carrez甲和carrez乙组成，carrez甲由质量百分比浓度为1.5-3.0％的K₄Fe(CN)₆·3H₂O水溶液组成；carrez乙由质量百分比浓度为3.0％-6.0％的ZnSO₄·7H₂O水溶液组成；其中在步骤(a)和(b)中，与工作液反应时间为15-30分钟，在步骤(b)中，与乳糖酶反应时间为2-4小时；其中标准葡萄糖溶液的浓度为1g/L，所述的混合试剂为等体积的carrez甲和carrez乙组成，其中吸光度值是在500-520nm的紫外可见分光光度计下测定，其中所用的工作液由等体积的酶试剂和等体积的酚试剂组成，所述酶试剂由≥10500U/L的葡萄糖氧化酶、≥8000U/L的过氧化物酶和≥0.1g/L的4-氨基安替吡啉组成，所述酚试剂由≥0.5g/L的苯酚组成。