一种寡核苷酸介导的大肠杆菌基因敲除或点突变的方法

摘要

本发明涉及一种通过寡核苷酸介导的重组工程手段对大肠杆菌基因组进行基因敲除或点突变的方法。首先通过重组工程将含有同源臂的蔗糖6-果糖转移酶基因和卡那霉素抗性基因的基因盒整合至靶基因，再将含同源臂的寡核苷酸通过重组工程与基因组上的同源序列进行同源重组而将蔗糖6-果糖转移酶基因和卡那霉素抗性基因去除，从而实现无任何碱基冗余的基因敲除和点突变。基因敲除的寡核苷酸设计与靶基因两侧的碱基序列一致，点突变的寡核苷酸则在寡核苷酸中引入需要突变的碱基。本发明不需要在体外克隆及预先在体外实现某个碱基位点突变或将突变基因转到细菌体内。本发明所述方法能够为遗传学、分子生物学、生物化学等研究及工业化生产提供一个有效的前期操作平台。

主权项

一种寡核苷酸介导的大肠杆菌基因敲除或点突变的方法，其特征在于：先通过重组工程将含有同源臂的sacB-neo基因盒整合至大肠杆菌基因组上的靶基因，再将含同源臂的寡核苷酸通过重组工程与基因组上的同源序列进行同源重组而将蔗糖6-果糖转移酶基因和卡那霉素抗性基因去除，从而实现基因敲除和点突变。