双歧杆菌冷冻浓缩发酵剂及其制备方法

摘要

本发明公开了一种双歧杆菌冷冻浓缩发酵剂及其制备方法。该制备方法可解决双歧杆菌培养困难、发酵剂活力低、保存期短的问题。制备方法包括：菌种活化试管培养、三角瓶一级菌种培养、种子罐二级菌种培养、发酵罐培养、菌体离心收集、添加保护剂、真空包装和冷冻贮藏。该发酵剂主要特点是：活菌含量高，保质期较长，接种用量少，可使每批发酵乳制品质量稳定，也防止了菌种的退化和污染，大大提高了发酵乳制品工业的劳动生产率和产品质量。本发明制备的冷冻浓缩发酵剂相对于真空冷冻干燥法制备的发酵剂，其方法简便，设备投资少，成本较低，容易实现。

主权项

一种双歧杆菌冷冻浓缩发酵剂的制备方法，其特征在于它包括下列步骤：A.双歧杆菌菌种扩大培养与双歧杆菌发酵培养双歧杆菌菌种为双歧杆菌属长双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、青春双歧杆菌、短双歧杆菌或两歧双歧杆菌；①菌种活化试管培养将培养基pH调至6.0～7.5，在0.05Mpa～0.14Mpa湿热灭菌15min～30min后备用；在菌种活化前，将低温保存的双歧杆菌安瓿瓶在室温下放置2h～3h，然后在无菌室将安瓿瓶用75％浓度的酒精棉球擦拭表面消毒，打开安瓿瓶，用无菌吸管吸取0.2ml～0.3ml的培养基加入安瓿瓶内，将安瓿瓶内菌物，按体积百分比为2％～5％的接种量接种于培养基中，试管培养，在厌氧条件下30℃～42℃培养20h～48h后，终止培养；以相同接种量、培养条件再连续活化2次，获得3代液体培养物；②三角瓶一级菌种培养取试管培养3代液体培养物，按体积百分比为2％～5％的接种量，接入三角瓶进行一级菌种液体培养，在厌氧条件下30℃～42℃培养20h～48h后，终止培养；③种子罐二级菌种培养取三角瓶一级菌种液体培养物，按体积百分比为2％～5％的接种量，接入种子罐进行二级菌种液体培养，在普通条件下30℃～42℃培养20h～48h后，终止培养；④发酵罐培养将经种子罐二级菌种培养的液体培养物，按体积百分比为2％～5％的接种量，接入发酵罐，在30℃～42℃培养，当发酵液pH低于5.5时，用NaOH溶液调节发酵液pH至6.0～6.5之间，培养20h～48h后停止培养；B.菌体离心收集设置离心机温度0℃～8℃，离心转速3000r/min～9000r/min、离心时间10min～30min，离心结束后除去上清液，收集沉淀的双歧杆菌菌体备用；C.添加保护剂 将离心收集的菌体悬浮于离心前发酵罐培养液原体积1/10～1/2的保护剂中；D. 真空包装用灭菌过的复合铝薄袋，盛装添加保护剂后的离心收集菌体，真空度≤0Mpa后，封口；E.冷冻贮藏：测定添加保护剂后的离心收集菌体共晶点，以低于共晶点温度5℃～30℃的条件冷冻贮藏双歧杆菌发酵剂，最终得到双歧杆菌冷冻浓缩发酵剂；C步骤添加的保护剂选自保护剂配方1～保护剂配方4中的一种，保护剂配方1的组成和重量配比为：脱脂牛奶或脱脂奶粉5～30份、甘油0.5～5份和水100份；保护剂在0.05Mpa～0.14Mpa湿热灭菌15min～30min，保护剂配方2的组成和重量配比为：脱脂牛奶或脱脂奶粉5～30份、甘油0.5～5份、蔗糖3～10份和水100份，保护剂在0.05Mpa～0.14Mpa湿热灭菌15min～30min，保护剂配方3的组成和重量配比为：脱脂牛奶或脱脂奶粉5～30份、甘油0.5～5份、L-半胱氨酸盐酸盐或抗坏血酸0.1～1份和水100份，保护剂中脱脂牛奶或脱脂奶粉和甘油及水在0.05Mpa～0.14Mpa湿热灭菌15min～30min，保护剂中L-半胱氨酸盐酸盐和抗坏血酸采用过滤除菌，保护剂配方4的组成和重量配比为：脱脂牛奶或脱脂奶粉5～30份、甘油0.5～5份、L-半胱氨酸盐酸盐或抗坏血酸0.1～1份、蔗糖3～10份和水100份；保护剂中脱脂牛奶或脱脂奶粉、甘油和蔗糖及水在0.05Mpa～0.14Mpa湿热灭菌15min～30min，保护剂中L-半胱氨酸盐酸盐和抗坏血酸采用过滤除菌。