一种链球菌特异性噬菌体裂解酶的生产方法

摘要

本发明涉及一种链球菌特异性噬菌体裂解酶的生产方法。该裂解酶由重链(约50kDa/条)PlyCA、轻链(约8kDa/条)PlyCB以1∶8的比例构成，其基因名称为PlyC，具有下述核苷酸序列：序列表中PlyCA(序列1)和PlyCB(序列3)的DNA序列，两者分别编码了序列表中PlyCA的氨基酸序列(序列2)和PlyCB的氨基酸序列(序列4)。本发明采用大肠杆菌表达体系，分别构建含裂解酶重链和轻链基因PlyCA和PlyCB的重组质粒，转化至BL21(DE3)细胞，发酵培养工程菌，使PlyCA和PlyCB得到高效表达。表达产物经纯化、复性，获得了链球菌噬菌体裂解酶PlyC。本发明的生产方法与常规方法相比，具有生产成本低廉、产物复性率高、产物活性强、生产方法安全、可满足大规模生产的优点。

主权项

一种链球菌特异性噬菌体裂解酶的生产方法，其特征在于包括如下步骤：1)扩增如下核苷酸序列所述的链球菌特异性噬菌体裂解酶PlyC的基因PlyCA和PlyCB：序列表中PlyCA和PlyCB的DNA序列，其分别编码了PlyCA和PlyCB的氨基酸序列；2)构建PlyCA和PlyCB的重组表达载体；3)将重组表达载体分别转入宿主细胞，获得表达链球菌噬菌体裂解酶PlyC重链PlyCA和轻链PlyCB的工程菌；4)发酵培养表达链球菌噬菌体裂解酶PlyC的重链PlyCA和轻链PlyCB的工程菌，诱导表达获得重组基因表达产物；5)将上述重组基因表达产物，经纯化分离、复性，得到链球菌特异性噬菌体裂解酶PlyC，其中所述纯化分离包括Ni-chelating sepharose亲和层析和超滤，其中，序列表中PlyCA和PlyCB的DNA序列分别是：atgagtaaga agtatacaca acaacaatac gaaaaatatt tagcacaacc agcaaataacacatttgggt tatcacctca acaggttgct gattggttta tgggtcaagc tggtgctaggcctgttatta actcgtatgg ggtaaatgct agtaatttag tatcaacgta catacctaaaatgcaggaat acggtgtatc atatacacta ttcttaatgt atactgtctt tgagggaggcggcgcaggta attggattaa tcattacatg tacgatacgg ggtctaatgg attagagtgtttggaacacg atttacaata catacatggc gtctgggaaa cttattttcc accagctttatctgcgccag aatgttaccc agctacggaa gataacgcag gtgctttaga tagattttatcaatcgctac caggccgaac atggggtgat gttatgatac ctagtacaat ggctggtaatgcttgggtat gggcttataa ctattgtgtt aacaaccaag gggctgcccc attagtttactttggcaatc catacgatag tcaaattgat agcttgcttg caatgggagc tgacccgtttacaggtggtt caattacagg tgatggaaaa aatcctagtg ttggcactgg gaatgctaccgtttctgcta gctcggaagc taacagagag aagttaaaga aagccctaac agatttattcaacaacaacc tagaacatct atcaggtgaa ttctacggta accaagtgtt gaatgctatgaaatacggca ctatcctgaa atgtgattta acagatgacg gacttaatgc cattcttcaattaatagctg atgttaactt acagactaac cctaacccag acaaaccgac cgttcaatcaccaggtcaaa acgatttagg gtcggggtct gatagagttg cagcaaactt agccaatgcacaggcgcaag tcggtaagta tattggtgac ggtcaatgtt atgcttgggt tggttggtggtcagctaggg tatgtggtta ttctatttca tactcaacag gtgacccaat gctaccgttaattggtgatg gtatgaacgc tcattctatc catcttggtt gggattggtc aatcgcaaatactggtattg ttaactaccc agttggtact gttggacgca aggaagattt gagagtcggcgcgatatggt gcgctacagc attctctggc gctccgtttt atacaggaca atacggccatactggtatca ttgaaagctg gtcagatact accgttacag tcttagaaca aaacattttagggtcaccag ttatacgcag cacctatgac cttaacacat tcctatcaac actaactggtttgataacat ttaaactcga gcaccaccac caccaccact ga，和atgagcaaga ttaatgtaaa cgtagaaaat gtttctggtg tacaaggttt cctattccataccgatggaa aagaaagtta cggttatcgt gcttttatta acggagttga aattggtattaaagacattg aaaccgtaca aggatttcaa caaattatac cgtctatcaa tattagtaagtctgatgtag aggctatcag aaaggctatg aaaaagctcg agcaccacca ccaccaccactga；而且，PlyCA和PlyCB的氨基酸序列分别是：Met Ser Lys Lys Tyr Thr Gln Gln Gln Tyr Glu Lys Tyr Leu Ala GlnPro Ala Asn Asn Thr Phe Gly Leu Ser Pro Gln Gln Val Ala Asp TrpPhe Met Gly Gln Ala Gly Ala Arg Pro Val Ile Asn Ser Tyr Gly ValAsn Ala Ser Asn Leu Val Ser Thr Tyr Ile Pro Lys Met Gln Glu TyrGly Val Ser Tyr Thr Leu Phe Leu Met Tyr Thr Val Phe Glu Gly GlyGly Ala Gly Asn Trp Ile Asn His Tyr Met Tyr Asp Thr Gly Ser AsnGly Leu Glu Cys Leu Glu His Asp Leu Gln Tyr Ile His Gly Val TrpGlu Thr Tyr Phe Pro Pro Ala Leu Ser Ala Pro Glu Cys Tyr Pro AlaThr Glu Asp Asn Ala Gly Ala Leu Asp Arg Phe Tyr Gln Ser Leu ProGly Arg Thr Trp Gly Asp Val Met Ile Pro Ser Thr Met Ala Gly AsnAla Trp Val Trp Ala Tyr Asn Tyr Cys Val Asn Asn Gln Gly Ala AlaPro Leu Val Tyr Phe Gly Asn Pro Tyr Asp Ser Gln Ile Asp Ser LeuLeu Ala Met Gly Ala Asp Pro Phe Thr Gly Gly Ser Ile Thr Gly AspGly Lys Asn Pro Ser Val Gly Thr Gly Asn Ala Thr Val Ser Ala SerSer Glu Ala Asn Arg Glu Lys Leu Lys Lys Ala Leu Thr Asp Leu PheAsn Asn Asn Leu Glu His Leu Ser Gly Glu Phe Tyr Gly Asn Gln ValLeu Asn Ala Met Lys Tyr Gly Thr Ile Leu Lys Cys Asp Leu Thr AspAsp Gly Leu Asn Ala Ile Leu Gln Leu Ile Ala Asp Val Asn Leu GlnThr Asn Pro Asn Pro Asp Lys Pro Thr Val Gln Ser Pro Gly Gln AsnAsp Leu Gly Ser Gly Ser Asp Arg Val Ala Ala Asn Leu Ala Asn AlaGln Ala Gln Val Gly Lys Tyr Ile Gly Asp Gly Gln Cys Tyr Ala TrpVal Gly Trp Trp Ser Ala Arg Val Cys Gly Tyr Ser Ile Ser Tyr SerThr Gly Asp Pro Met Leu Pro Leu Ile Gly Asp Gly Met Asn Ala HisSer Ile His Leu Gly Trp Asp Trp Ser Ile Ala Asn Thr Gly Ile ValAsn Tyr Pro Val Gly Thr Val Gly Arg Lys Glu Asp Leu Arg Val GlyAla Ile Trp Cys Ala Thr Ala Phe Ser Gly Ala Pro Phe Tyr Thr GlyGln Tyr Gly His Thr Gly Ile Ile Glu Ser Trp Ser Asp Thr Thr ValThr Val Leu Glu Gln Asn Ile Leu Gly Ser Pro Val Ile Arg Ser ThrTyr Asp Leu Asn Thr Phe Leu Ser Thr Leu Thr Gly Leu Ile Thr PheLys Leu Glu His His His His His His，和Met Ser Lys Ile Asn Val Asn Val Glu Asn Val Ser Gly Val Gln GlyPhe Leu Phe His Thr Asp Gly Lys Glu Ser Tyr Gly Tyr Arg Ala PheIle Asn Gly Val Glu Ile Gly Ile Lys Asp Ile Glu Thr Val Gln GlyPhe Gln Gln Ile Ile Pro Ser Ile Asn Ile Ser Lys Ser Asp Val GluAla Ile Arg Lys Ala Met Lys Lys Leu Glu His His His His His His。