一种壳聚糖微球固定化胰蛋白酶的方法

摘要

本发明提供了一种壳聚糖微球固定化胰蛋白酶的方法，属于食品加工技术领域。本发明以壳聚糖为固定化载体，将壳聚糖在醋酸溶液中溶解后，利用反相悬浮法制备壳聚糖微球，然后利用戊二醛为交联剂对壳聚糖微球进行交联活化，将交联活化后的壳聚糖微球与胰蛋白酶溶液混合进行固定化，制得固定化胰蛋白酶。胰蛋白酶是食品工业中蛋白质改性、水解最常用的酶制剂之一，本发明通过壳聚糖固定化胰蛋白酶，使胰蛋白酶可以重复使用，提高了胰蛋白酶的利用效率，降低了蛋白质水解过程中酶的用量和生产成本，可广泛应用于牛乳、肉类、水产等蛋白质的水解过程与改性。

主权项

一种壳聚糖微球固定化胰蛋白酶的方法，其特征是以壳聚糖为固定化载体，将壳聚糖在醋酸溶液中溶解后，利用反相悬浮法制备壳聚糖微球，然后利用戊二醛为交联剂对壳聚糖微球进行交联活化，将交联活化后的壳聚糖微球与胰蛋白酶溶液混合进行固定化，制得固定化胰蛋白酶；所述的壳聚糖微球的制备及活化：称取一定量的壳聚糖溶于质量浓度1％-3％的醋酸溶液中，制得质量浓度为2％-4％的壳聚糖溶液，在容器中加入液体石蜡和span-80和致孔剂乙酸乙酯，高速搅拌的情况下缓慢加入壳聚糖溶液，保持高速搅拌40-100min，使壳聚糖液滴均匀分散，得到悬浮的乳状液。然后缓慢往乳状液中加入戊二醛溶液，使乳状液中戊二醛的质量浓度达到2％-6％，在4-45℃下交联活化1-10h，静置冷却后，将所得乳状液倒入等体积的NaOH/乙醇混合液中，充分混合振荡，而后静置，弃去油层和水层，最后用去离子水反复洗涤抽滤至中性，得到活化的壳聚糖微球；所述的固定化酶的制备：用pH6.0-7.0的磷酸盐缓冲溶液溶解胰蛋白酶，然后按胰蛋白酶/壳聚糖微球为0.5mg/g-4mg/g的比例将胰蛋白酶溶液与壳聚糖微球混合，搅拌均匀后于4℃冰箱中静置5-24h，用pH6.0-7.0的缓冲液抽洗至滤液中检测不到蛋白质存在即得到固定化胰蛋白酶。