发明名称 |
一种聚合酶链式反应检测曲霉菌的方法 |
摘要 |
本发明公开了一种聚合酶链式反应检测曲霉菌的方法,其步骤是:A、样品的处理:经2%纤维素酶(0.65mol/LNaCl配制)和20mg/ml蛋白酶K处理后,于液氮、沸水浴中循环处理;B、PCR体系:将处理后的菌液加入PCR反应体系中进行PCR扩增;C、PCR产物的检测:对扩增后的DNA样品进行琼脂糖凝胶电泳。本发明方法简便,操作方便,避免了传统曲霉菌DNA提取方法中繁琐的物理破除细胞壁的过程,并省去了DNA抽提步骤,克服了现有技术中因污染而影响检测结果的不足。 |
申请公布号 |
CN101768632A |
申请公布日期 |
2010.07.07 |
申请号 |
CN200810246313.X |
申请日期 |
2008.12.30 |
申请人 |
华中科技大学同济医学院附属协和医院 |
发明人 |
周东风;肖晶;孟浦;李立家 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I;C12Q1/04(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
华中科技大学专利中心 42201 |
代理人 |
夏惠忠 |
主权项 |
一种聚合酶链式反应检测曲霉菌的方法,包括以下步骤:A.将待检样品依次用纤维素酶和蛋白酶K处理,以破坏待检样品中所含曲霉菌的细胞壁;B.加入1%TritonX-100,置于液氮中冷冻,再置于沸水中加热,重复此冷冻和加热过程,使待检样品中所含曲霉菌之DNA得以释放;C.取经过步骤A和步骤B处理过的样品3μL~15μL模板,加入PCR反应体系中,用曲霉菌通用引物或曲霉菌特异性引物进行聚合酶链式反应扩增;D.对扩增后的DNA样品进行0.8%~1%琼脂糖凝胶电泳,在与所用引物相应的预期条带范围内检测到扩真增条带,即可确定样品中含有曲霉菌或确定菌种。 |
地址 |
430022湖北省武汉市汉口解放大道1277号 |