| 摘要 |
1. Рекомбинантная плазмида pD1spGBD размером 4247 н.п., обеспечивающая экспрессию бифункционального рекомбинантного белка D1-GBD, состоящего из домена 1 белка LigA L. interrogans, спейсера из остатков глицина и серина и 1,3 β-глюкансвязывающего домена Cl. thermocellum (GBD), содержащая ! искусственный бактериальный оперон химерного белка, включающий ! промоторную область раннего промотора бактериофага Т5 (7-87 п.н.), ! рекомбинантный ген (115-970 н.п.), кодирующий целевой химерный белок D1-GBD, ! нетранслируемую область терминации транскрипции бактериального оперона (993-1089 н.п.); ! бактериальный оперон bla (4042-3182 н.п. комплементарной цепи), кодирующий бета-лактамазу, являющуюся селективным маркером для отбора клонов-трансформантов Е. coli методом контр-селекции; ! бактериальный участок инициации репликации типа ColE 1 (2419 н.п.). ! 2. Штамм Escherichia coli M15 [pREP4, pD1spGBD], полученный трансформацией штамма Escherichia coli M15 /pREP4 плазмидой pD1spGBD, депонированный во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУП ГосНИИгенетика под номером В-9899 - продуцент рекомбинантного белка D1-GBD, состоящего из домена 1 белка LigA L. Interrogans, спейсера из остатков глицина и серина и 1,3 β-глюкансвязывающего домена Cl. thermocellum (GBD). ! 3. Способ получения рекомбинантного белка D1-GBD, включающий выращивание клеток штамма Escherichia coli M15 [pREP4, pDlspGBD], получение супернатанта, содержащего белок, иммобилизацию белка путем добавления к супернатанту суспензии 1,3-β-глюкансодержащего сорбента - зимозана А, инкубирование, отмывание сорбента со связавшимся белком, концентрированно иммобилизованного на зимозане А белка на колонке; снятие белка с сорбента, проведение очистки для получения целевого белка. ! 4. Рекомбинант |
