检测蛋白酶的活力

摘要

本发明公开了一种通过预先去除抑制后检测酶活力来确定蛋白酶的总量的方法和仪器。在生物样品中，溶酶体蛋白酶是完全(例如在血清中)或部分(例如在组织匀浆液中)被抑制的。去抑制的方法需要将以共价或吸附方式连接了抑制剂结合物质的如塑料带等固体支持材料(如尼龙或硝酸纤维素)浸入到检测样品中，其中抑制剂结合物质与蛋白酶相应的抑制剂的结合要比蛋白酶更强。在发生去抑制之后，从检测的液体样品中移除塑料带，然后将检测样品转入酶活力的检测。可以从其上切下荧光发光团7-氨基-4-三氟甲基香豆素的荧光发光底物被证明在活力检测中具有相当优势。用这些底物结合荧光分析仪在微孔板中进行血清检测，能够获得比传统AMC底物高至少10倍的灵敏度，并且这种广泛用于临床实验室的检测装置能够有效地对血清中这些酶的活力进行荧光测定。

主权项

一种检测液体样品中至少一种蛋白酶活力的方法，所述样品中除了需要检测活力的至少一种蛋白酶之外，如有必要，还含有所述蛋白酶相对应的至少一种蛋白酶抑制剂，该方法包括下列步骤：通过将样品与以共价或者吸附方式结合了抑制剂结合物质的载体相接触，去除样品中蛋白酶上的蛋白酶抑制剂，所述抑制剂结合物质对蛋白酶抑制剂的亲和/结合强度要高于蛋白酶本身；从样品中将载体以及载体上结合的蛋白酶抑制剂一起分离出来；将需要测定活力的至少一种蛋白酶的底物加入到样品中，并且记录蛋白酶与底物的蛋白质水解反应。