一种快速分离纯化R-藻红蛋白、R-藻蓝蛋白的方法

摘要

一种快速分离纯化R-藻红蛋白、R-藻蓝蛋白的方法，属于红藻分离纯化技术领域。本发明以红藻为材料，应用经冻溶和低离子强度溶涨提取R-藻红蛋白、R-藻蓝蛋白，经硫酸铵沉淀进行初步纯化，然后使用阴离子交换层析吸附富集R-藻红蛋白、R-藻蓝蛋白，并通过一步阴离子交换层析分步洗脱大量制备得到高纯度的R-藻红蛋白、R-藻蓝蛋白。本方法省去了传统的应用分子筛层析结合羟基磷灰石层析多步层析的复杂分离纯化程序，克服了难于规模化快速制备的难题，操作简便，省时省力，对设备要求简单，得率高。

主权项

一种快速分离纯化R-藻红蛋白、R-藻蓝蛋白的方法，步骤如下：(1)R-藻红蛋白、R-藻蓝蛋白的提取原料为天然多管藻，-20℃冷冻保存；取冷冻保存的多管藻藻体10g，加入pH5.8、20mM醋酸缓冲液10ml，反复冻溶，悬液4℃10000rpm离心15min，上清液即为R-藻红蛋白、R-藻蓝蛋白的粗提液；(2)R-藻红蛋白、R-藻蓝蛋白的初步纯化向步骤(1)得到的R-藻红蛋白、R-藻蓝蛋白的粗提液中加入固体硫酸铵，至浓度为60％(w/v)，放置4h，4℃10000rpm离心15min，收集沉淀部分；将沉淀溶于pH5.6、20mM的醋酸缓冲液中，然后用pH5.6、20mM的醋酸缓冲液进行透析，收集透析液；(3)离子交换层析制备R-藻红蛋白、R-藻蓝蛋白将预先用pH5.6、含50mM NaCl的20mM醋酸缓冲液平衡过的阴离子交换柱，加入缓冲液为pH5.6、20mM醋酸缓冲液的R-藻红蛋白、R-藻蓝蛋白粗提液进行吸附；将吸附满R-藻红蛋白、R-藻蓝蛋白的阴离子交换柱，使用pH5.6、20mM醋酸缓冲液冲洗阴离子交换柱，将阴离子交换柱上过量的R-藻红蛋白、R-藻蓝蛋白冲洗掉；先用pH5.0、含50mM NaCl的20mM醋酸缓冲液进行洗脱，将R-藻蓝蛋白洗脱下来，得到R-藻蓝蛋白；再用pH4.0、含50mM NaCl的20mM醋酸缓冲液进行洗脱，将R-藻红蛋白洗脱下来，得到R-藻红蛋白。