人源化的胶原抗体及相关方法

摘要

本发明提供一种经接枝的抗体或其功能性片断，其包括在重链互补决定区(CDR)的一个或多个CDR中具有至少一个氨基酸替换的一个或多个CDR，其中经接枝的抗体或其功能性片断对隐蔽胶原表位具有特异结合活性。本发明还提供一种使用对隐蔽胶原表位具有特异结合活性的抗体的方法，包括抑制血管生成、肿瘤生长及转移的方法。

主权项

一种抗体或其功能性片段，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述抗体或其功能片段在一个或多个互补决定区(CDR)包含至少一个氨基酸替换，所述抗体或其功能片段因此特异性与隐蔽胶原表位结合，并且所述重链可变区包含：(i)重链CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO：38，或者氨基酸序列为具有一个或多个以下替换的SEQ ID NO：38：(a)7位的丝氨酸被脯氨酸或色氨酸替换；或(b)12位的甘氨酸被色氨酸、亮氨酸或丙氨酸替换；(ii)重链CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO：40，或者氨基酸序列为具有一个或多个以下替换的SEQ ID NO：40：(a)10位的酪氨酸被丝氨酸、丙氨酸、脯氨酸或苏氨酸替换；或(b)15位的赖氨酸被脯氨酸替换；和(iii)重链CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO：42，或者氨基酸序列为具有一个或多个以下替换的SEQ ID NO：42：(a)1位的精氨酸被脯氨酸、谷氨酰胺、亮氨酸、苏氨酸或缬氨酸替换；(b)6位的天冬酰胺被缬氨酸或色氨酸替换；(c)11位的蛋氨酸被谷氨酰胺、天冬酰胺或苏氨酸替换；或(d)13位的酪氨酸被亮氨酸、苏氨酸、蛋氨酸或组氨酸替换；且所述轻链可变区包含：(iv)轻链CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO：32，或者氨基酸序列为具有一个或多个以下替换的SEQ ID NO：32：(a)7位的缬氨酸被脯氨酸或色氨酸替换；(b)8位的组氨酸被亮氨酸或丝氨酸替换；(c)9位的丝氨酸被色氨酸替换；(d)10位的天冬氨酰被酪氨酸、色氨酸或谷氨酰胺替换；(e)12位的天冬酰胺被酪氨酸替换；或(f)15位的亮氨酸被苯丙氨酸或缬氨酸替换；(v)轻链CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO：34，或者氨基酸序列为具有一个或多个以下替换的SEQ ID NO：34：(a)1位的赖氨酸被丝氨酸替换；(b)2位的缬氨酸被丙氨酸替换；(c)4位的天冬酰胺被丝氨酸替换；(d)5位的天冬氨酰被亮氨酸替换；或(e)7位的丝氨酸被色氨酸或苯丙氨酸替换；和(vi)轻链CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO：36，或者氨基酸序列为具有一个或多个以下替换的SEQ ID NO：36：(a)1位的苯丙氨酸被缬氨酸或组氨酸替换；(b)2位的谷氨酰胺被精氨酸或色氨酸替换；(c)3位的甘氨酸被丝氨酸替换；(d)4位的丝氨酸被色氨酸或谷氨酸替换；(e)5位的组氨酸被亮氨酸、苏氨酸、丝氨酸、丙氨酸或谷氨酰胺替换；(f)6位的缬氨酸被苏氨酸或苯丙氨酸替换；或(g)9位的苏氨酸被丙氨酸、精氨酸、组氨酸、赖氨酸或异亮氨酸替换；且所述抗体或其抗原结合片段因此具有至少一个所述任何替换；或者是，所述重链可变区包含：(i)重链CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO：26，或者氨基酸序列为具有一个或多个以下替换的SEQ ID NO：26：(a)6位的精氨酸被组氨酸替换；(b)9位的蛋氨酸被异亮氨酸替换；或(c)10位的丝氨酸被苏氨酸、丙氨酸或甘氨酸替换；(ii)重链CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO：28，或者氨基酸序列为具有一个或多个以下替换的SEQ ID NO：28：(a)9位的异亮氨酸被丙氨酸、丝氨酸、缬氨酸替换；(b)14位的丝氨酸被酪氨酸、丙氨酸、组氨酸或甘氨酸替换；(c)16位的赖氨酸被天冬氨酸或谷氨酰胺替换；或(d)17位的天冬氨酸被赖氨酸或丝氨酸氨酸替换；和(iii)重链CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO：30，或者氨基酸序列为具有一个或多个以下替换的SEQ ID NO：30：(a)3位的天冬氨酸被脯氨酸、甘氨酸、苏氨酸或丙氨酸替换；(b)4位的甘氨酸被脯氨酸、丙氨酸或组氨酸替换；或(c)11位的酪氨酸被脯氨酸或天冬酰胺或苏氨酸替换；且所述轻链可变区包含：(iv)轻链CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO：20，或者氨基酸序列为具有一个或多个以下替换的SEQ ID NO：20：(a)4位的谷氨酰胺被精氨酸或丝氨酸替换；(b)8位的天冬酰胺被丝氨酸替换；(c)9位的丝氨酸被酪氨酸、色氨酸、组氨酸或精氨酸替换；(d)10位的甘氨酸被酪氨酸、精氨酸、组氨酸或异亮氨酸替换；或(e)12位的谷氨酰胺被赖氨酸替换；(v)轻链CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO：22：和(vi)轻链CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO：24，或者氨基酸序列为具有一个或多个以下替换的SEQ ID NO：24：(a)5位的丝氨酸被谷氨酰胺、甘氨酸、亮氨酸、丙氨酸、苏氨酸或缬氨酸替换；或(b)6位的酪氨酸被天冬酰胺、丝氨酸、脯氨酸或蛋氨酸替换；且所述抗体或其抗原结合片段因此具有至少一个所述任何替换。