一种豇豆锈病抗性的分子标记检测方法

摘要

本发明公开了一种豇豆锈病抗性的分子标记检测方法，属于蔬菜分子遗传育种技术领域。该方法包括：待检测豇豆和阴性对照及阳性对照植株样品的采集；样品基因组DNA的提取；引物的设计；最佳扩增体系的建立；样本检测与判定等步骤。本发明具简便易行，快速、灵敏、特异性强，一般只需8个小时左右，成本低廉，检测一个样本低于1.5元，通过早期检测，可明显缩短豇豆抗锈病育种或市场种子种性鉴定的周期等特点。该方法可在豇豆抗锈病育种或市场种子种性鉴定中应用。

主权项

一种豇豆锈病抗性的分子标记检测方法，其特征在于包括以下步骤：1)、待检测豇豆叶片样品的采集：取豇豆植株顶部较为幼嫩的叶片，每份0.2-0.3克，采集后现用或在-20℃下冷冻保存；2)、阴性对照品种植株和阳性对照品种植株叶片样品的采集：取豇豆顶部较为幼嫩的叶片，每份0.2-0.3克，采集后现用或在-20℃下冷冻保存；3)、样品基因组DNA的提取：采用常规的CTAB法或基因组提取试剂盒提取基因组DNA，TE溶解或双蒸水溶解，现用或在-20℃冷冻保存；4)、根据已获得的和豇豆抗锈病基因紧密连锁的AFLP标记全序列设计一对引物，抗性检测样品与阳性对照样品的扩增片段长度为98bp，引物序列为：引物I：5’---TCAACAGTGTCAGACCAAAC---3’引物II：5’---GTTGAAGATTGTGGAAAGCT---3’；5)、最佳扩增体系的建立：利用正交试验，摸索建立和豇豆抗锈病基因连锁特异片段的最佳扩增体系；6)、样本检测与判定：根据待检测样品和对照样品的特异片段的扩增结果，对被检测豇豆植株是否为抗性株进行判定。